基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析苦豆子堿對(duì)產(chǎn)膜表皮葡萄球菌硫代謝通路和菌體ROS產(chǎn)生的影響.pdf

1、表皮葡萄球菌是一種凝固酶陰性條件致病菌，但極易產(chǎn)生生物膜同時(shí)可作為耐藥基因儲(chǔ)存庫(kù)，使得耐藥性問題變得日趨嚴(yán)重。最新研究表明，中藥能夠逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性，并且增強(qiáng)現(xiàn)有抗生素的殺菌效果，但中藥作用機(jī)制十分復(fù)雜，只有深入研究中藥對(duì)細(xì)菌作用機(jī)理，才能為中藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　本研究以產(chǎn)膜表皮葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC35984)和臨床分離的強(qiáng)產(chǎn)膜株S3為實(shí)驗(yàn)材料，用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，分析苦豆子堿作用前后表皮葡萄球菌差異基因的表達(dá)情況。結(jié)

2、果表明，中藥苦豆子堿、苦參堿和抗生素環(huán)丙沙星在抑菌和亞抑菌濃度下對(duì)表皮葡萄球菌作用12-18 h后均有較明顯的抑制效果。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)抗氧化活性相關(guān)的差異表達(dá)基因占該類全部基因的比例較高。同時(shí)，有9個(gè)差異表達(dá)基因富集在硫代謝通路，富集程度最高。說明苦豆子堿通過下調(diào)半胱氨酸合成酶、絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶、亞硫酸鹽還原酶等關(guān)鍵酶的表達(dá)，影響表皮葡萄球菌硫代謝功能。
　　重點(diǎn)檢測(cè)苦豆子堿、苦參堿、環(huán)丙沙星作用后菌體內(nèi)活性氧含量的變化

3、，同時(shí)測(cè)定一氧化氮(NO)以及抗氧化系統(tǒng)中各種酶活的變化。結(jié)果表明，藥物在MIC和1/2MIC下刺激菌體產(chǎn)生大量ROS，比用藥前菌體內(nèi)ROS含量升高2-4倍，且菌體內(nèi)ROS的含量呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。深入分析用亞抑菌濃度藥物誘導(dǎo)表皮葡萄球菌不同代次下的ROS產(chǎn)生和MIC變化規(guī)律，并總結(jié)藥物作用細(xì)菌ROS產(chǎn)生與耐藥性的相關(guān)性。結(jié)果表明，抗生素和中藥在亞抑菌濃度下都能刺激菌體ROS生成，亞抑菌濃度抗生素作用下的ROS產(chǎn)量隨代次增加而減少9.