印度塊菌(Tuber indicum)的分離純化培養(yǎng)及其菌根促生細菌的研究.pdf

1、印度塊菌（Tuberindicum）作為中國的主要商業(yè)塊菌出口歐洲很多年，其形態(tài)和分子序列與法國黑孢塊菌（TubermelanosporumVittad.）高度相似引起了人們的關(guān)注。對印度塊菌的分類、生理生態(tài)、菌根合成等研究也在不斷深入。本研究從印度塊菌的菌絲體分離培養(yǎng)和菌根促生細菌的獲得入手，進行了一系列實驗，獲得塊菌分離純化培養(yǎng)的條件及其有關(guān)數(shù)據(jù);通過實驗篩選獲得促進印度塊菌菌根形成的菌根促生細菌，能在人工培養(yǎng)塊菌菌根的工作中得以應

2、用。
　　 本研究從三個方面對印度塊菌的分離純化培養(yǎng)進行了實驗和總結(jié):(1)培養(yǎng)基的篩選:常用培養(yǎng)基、塊菌培養(yǎng)成功的培養(yǎng)基、外生菌根菌菌絲培養(yǎng)時所用的培養(yǎng)基以及修飾培養(yǎng)基;(2)塊菌分離方法的選擇。實驗中分別采用了組織分離法、孢子分離法和菌根分離法;(3)培養(yǎng)條件的選擇。將接種后的培養(yǎng)基置于25℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，待有菌絲長出后進行溫度梯度的比較。最終實驗結(jié)果表明(1)HM培養(yǎng)基適于印度塊菌菌絲體的生長;在培養(yǎng)基中加入利于孢子萌

3、發(fā)的物質(zhì)，如松針浸出液、松根浸出液等對菌絲體的生長有幫助;(2)組織分離法是方便、快捷，可優(yōu)先選擇的方法，但該法培養(yǎng)成功率較低;孢子分離法與菌根分離法操作步驟較復雜，且污染率較高。
　　 本研究選擇華山松為實驗樹種，挑選從根際土壤中分離到的11種細菌作為供試細菌，將印度塊菌菌劑與細菌混合接種于華山松上，并通過對印度塊菌與華山松形成的菌根數(shù)、華山松的株高和地徑三方面的統(tǒng)計與分析來獲得菌根促生細菌。實驗最終獲得濃度均為2.4×109

4、cfu/ml的3種菌根促生細菌，即對菌根數(shù)、株高和地徑均有極顯著促進作用(P＜0.01)的Pseudomonassp.JCM5481(P143)、Streptomycessp.EN31(S191)、Variovoraxparadoxus(V633);以及濃度為0.8×109cfu/ml株的2種菌根促生細菌，即對菌根數(shù)、株高和地徑均有顯著促進作用(P＜0.05)的Pseudomonaschlororaphis(P11)、Pseudomon