包蟲自然抗原與卡介苗免疫及泡球蚴攻擊感染的鼠體內(nèi)細(xì)胞因子的變化.pdf

1、目的：通過對比自然包蟲抗原和卡介苗免疫與免疫后用泡球蚴原頭蚴攻擊制造的多房包蟲病繼發(fā)感染的昆明鼠動物模型體內(nèi)產(chǎn)生的細(xì)胞因子成分及各成分量的變化，評估感染泡球蚴病中間宿主體內(nèi)的細(xì)胞免疫反應(yīng)狀態(tài)。探討各類輔助型T細(xì)胞及其細(xì)胞因子對病原體產(chǎn)生的抗感染免疫和對宿主產(chǎn)生的免疫病理狀態(tài)的調(diào)節(jié)機制。
　　方法：（1）免疫和免疫后泡球蚴感染的動物模型的建立：用實驗室常規(guī)制備的單房包蟲的囊液抗原和多房棘球蚴的組織抗原以及用市售的卡介苗免疫昆明小鼠。

2、并取經(jīng)過加強免疫三次（每月一次，首次0.2mg，加強每次0.1mg，卡介苗0.05mg，皮下注射抗原/卡介苗,）后各免疫組的一半鼠用含量為2000個/ml的泡球蚴原頭蚴攻擊制造繼發(fā)型泡球蚴動物模型。并設(shè)空白對照（非感染組）和感染對照（不經(jīng)免疫用原頭蚴直接感染）；因此，共分為八組，每組雌雄各10只，共20只，對照組雌雄各5只。（2）動物模型的觀察和樣本的采集：免疫組、攻擊組（攻擊感染四個月后）及對照組小鼠經(jīng)麻醉處死前取血分離血清，并立即取

3、肝脾組織保存于RNALater組織保存液內(nèi)，-80°C保存?zhèn)溆?。處死后，剖腹、剖胸檢查泡球蚴包囊生長情況，記錄囊重和測量體積，留取普通病理標(biāo)本。并分別用微點陣法和流式熒光技術(shù)檢測血清和肝組織中的Th1、Th2、Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子。（3）用SPSS軟件對比各組的細(xì)胞因子的變化，以95％的可信限為界定顯著性差異值。
　　結(jié)果:（1）動物模型成活率為73%（102/140）；攻擊后成功感染率分別為：感染對照組（55%）；單房包

4、蟲囊液抗原免疫組平均（30%）；多房包蟲組織勻漿抗原免疫攻擊組（40%）；卡介苗免疫攻擊組平均（40%）。（2）各組小鼠表現(xiàn)出不同的免疫應(yīng)答模式，單房包蟲（CE）抗原免疫組Th1類細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1水平增高與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義。CE抗原免疫后原頭蚴攻擊感染組Th1細(xì)胞因子IL-2、IL-1、IFN-γ、水平與對照組相比水平升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義。多房包蟲（AE）抗原免疫組Th2細(xì)胞因子IL-10、IL-13水平升高與對照

5、組相比，有顯著性意義。AE抗原免疫后原頭蚴攻擊感染組IL-4水平降低與對照組和感染對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義，IL-10、IL-13與感染對照組比較水平下降，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義?？ń槊缑庖呓MIL-5、IL-6、IL-13與對照組相比水平下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義?？ń槊缑庖吆蠊艚MIL-13、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10與對照組相比水平升高，IL-1、IL-12、IFN-γ與PBS對照組比較水平升高差別有顯著性意義。各組都表達(dá)Th17

6、類細(xì)胞因子IL-17、IL-21、IL-22，AE抗原免疫后攻擊組的Th17細(xì)胞因子IL-17、IL-21、IL-22水平與對照組相比水平降低，其中IL-21水平與PBS對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：(1)流式熒光懸浮微陣列技術(shù)因具有高通量、標(biāo)本用量少、檢測指標(biāo)多等優(yōu)點能夠應(yīng)用于小鼠包蟲病感染中的復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)作用的研究。(2)多房包蟲感染中存在復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)，其中CE抗原免疫能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生Th1細(xì)胞的優(yōu)勢應(yīng)答

7、，但產(chǎn)生的作用不能阻止泡球蚴的生長。AE抗原誘導(dǎo)機體產(chǎn)生Th2類細(xì)胞的免疫應(yīng)答，卡介苗免疫后Th2類細(xì)胞因子的水平下降，可能與卡介苗免疫誘導(dǎo)的Th1類細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)下調(diào)Th2類細(xì)胞因子的產(chǎn)生。CE抗原免疫后攻擊組Th1類細(xì)胞因子升高在抗泡球蚴原頭蚴感染的過程中發(fā)揮作用，AE抗原免疫后攻擊組Th1類細(xì)胞因子含量較低，分析與多房棘球蚴原頭蚴抑制機體的Th1細(xì)胞的免疫應(yīng)答有關(guān)。(3)泡球蚴能夠影響記憶性Th17細(xì)胞的增殖和分化，Th17細(xì)胞