HCV核心蛋白下調(diào)E-cadherin表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：據(jù)統(tǒng)計，原發(fā)性肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是目前全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。非酒精性脂肪肝病、肝炎病毒的慢性感染、過量攝入酒精、黃曲霉素以及自身免疫性肝病等都是引起HCC的重要原因，其中丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染是導(dǎo)致HCC發(fā)生的其中一個重要原因。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，目前全球HCV感染率大約3％，并且每年因為HCV感染導(dǎo)致肝細(xì)胞發(fā)生慢性炎癥、肝硬化，甚至

2、是肝癌的患者數(shù)正以1%-7%的速度增加。因此，HCV慢性感染已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的社會公共衛(wèi)生問題。HCV病毒主要可以分為6種基因型，80多種亞型，其中我國多發(fā)為1b型和6型，研究表明，HCV1b型感染患者的肝細(xì)胞損傷程度較其他基因型感染者更加嚴(yán)重，并且發(fā)展為肝硬化，甚至是肝癌的幾率更高。所以，開展有關(guān)HCV感染引起HCC相關(guān)機(jī)制的研究具有極其重要的意義。
　　1989年，Choo QL等首次鑒定出HCV病毒，它是除乙型、甲型

3、肝炎病毒以外引起慢性肝炎的主要病原體。HCV屬于黃病毒科嗜肝病毒，為基因組全長9.6kb的單股正鏈RNA病毒，在各種宿主細(xì)胞信號肽酶以及病毒蛋白酶的共同作用下，可以編碼成至少10種病毒蛋白，從氨基端到羧基端依次包括3種結(jié)構(gòu)蛋白（Core、E1、E2）以及P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B7種非結(jié)構(gòu)蛋白。其中HCV核心蛋白（HCV core）在病毒與宿主細(xì)胞相互作用中扮演了非常重要的角色，具有直接的致癌效應(yīng)，其誘

4、導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控異常參與了HCV相關(guān)肝癌的發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)移過程，但具體機(jī)制不明。
　　Snail是轉(zhuǎn)錄因子SNAIL超家族的重要成員，研究表明Snail是上皮細(xì)胞向間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象中的關(guān)鍵誘導(dǎo)分子，對干細(xì)胞特性的維持、細(xì)胞生存和凋亡以及免疫調(diào)節(jié)起著重要作用。Snail基因總共含有264個氨基酸，主要包含3個功能結(jié)構(gòu)域，有證據(jù)表明，Snail基因羧基端的鋅指結(jié)構(gòu)區(qū)可以特異性識別含有5’-CAGGTG-3’堿基序列的E-box

5、結(jié)構(gòu)，抑制基因的表達(dá)，這一機(jī)制被認(rèn)為是Snail抑制E-cadherin表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵。
　　1980年，人們首次發(fā)現(xiàn)一種具有絲氨酸/蘇氨酸活性的激酶—糖原合成酶激酶-3（Glycogen synthase kinase-3，GSK-3），是參與調(diào)控糖原合成的關(guān)鍵酶之一。GSK-3家族分為α和β兩個亞型，其中GSK-3β是Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信號通路的關(guān)鍵組成部分，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、分化

6、、增殖與凋亡等過程，在腫瘤細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮了重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，HepG2肝癌細(xì)胞株中的E-cadherin表達(dá)水平明顯下降，而胞漿內(nèi)p-GSK3β（GSK-3β失活）的水平卻顯著上升，說明GSK-3β可能參與調(diào)控E-cadherin轉(zhuǎn)錄。
　　本課題組前期實驗研究發(fā)現(xiàn)：（1）在HCV核心蛋白過表達(dá)的肝癌細(xì)胞和肝前體細(xì)胞、HCV感染的Huh7.5.1細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯增強(qiáng)，通過對EMT分子標(biāo)志物的檢測發(fā)現(xiàn)：HCV核心蛋