胰島素樣生長因子-1下調(diào)E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、上皮性卵巢癌（EOC）是女性最常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其高死亡率的最主要原因是大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)已是晚期，且伴隨廣泛的腹腔轉(zhuǎn)移。對于上皮性卵巢癌患者而言，腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是上皮性卵巢癌患者最主要的致死原因。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個相互作用相互影響的多步驟過程，首先最關(guān)鍵的一步是腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤上分離并且侵入到周邊組織。在正常組織中，細(xì)胞彼此存在緊密連接、縫隙連接、細(xì)胞橋粒等連接方式固定細(xì)胞從而使細(xì)胞不能自由移動，但是，腫瘤細(xì)胞之間的連接方式

2、發(fā)生改變，使腫瘤細(xì)胞得以從原發(fā)病灶脫落，從而促進(jìn)了腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。目前研究發(fā)現(xiàn)，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)影響上皮來源的腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是指上皮細(xì)胞失去它們的上皮特性并且獲得典型的間質(zhì)細(xì)胞的特性，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化不僅促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動而且在物種進(jìn)化過程中產(chǎn)生新的組織類型，甚至上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是疾病的發(fā)病機(jī)制。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化不僅是上皮細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的表型特征，而且腫瘤細(xì)胞的分子標(biāo)志物也會發(fā)生相應(yīng)的改變，最典型的標(biāo)志性變化是上皮性標(biāo)記物上皮

3、性鈣黏連蛋白（E-cad）的表達(dá)下降或缺失。上皮性鈣黏連蛋白的基因位于染色體16q22.1，蛋白分子量是120kD，它是一個主要的細(xì)胞間黏附分子，其功能主要是維持上皮細(xì)胞之間的相互黏附并抑制細(xì)胞的自由移動，而上皮性鈣黏連蛋白表達(dá)下降或缺失導(dǎo)致細(xì)胞間的黏附能力減弱，細(xì)胞的運(yùn)動能力增強(qiáng)。目前已有研究表明，在卵巢癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、食管癌、肺癌、甲狀腺癌等腫瘤中，上皮性鈣黏連蛋白的低表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，因此，可以認(rèn)為

4、上皮性鈣黏連蛋白可以抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　胰島素樣生長因子-1(IGF-1)是一個由70個氨基酸組成的單鏈，它包括三個二硫鍵及四個結(jié)構(gòu)域，分子量為7649kDa，它在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長及新陳代謝等方面起重要作用。有研究表明胰島素樣生長因子-1在上皮性卵巢癌患者血清中表達(dá)增高，增加患上皮性卵巢癌的風(fēng)險，促進(jìn)上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展以及降低上皮性卵巢癌的預(yù)后，另外在乳腺癌、前列腺癌、胃癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子-1可以通過不同信號通路

5、誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，但是胰島素樣生長因子-1在上皮性卵巢癌中的作用尚未有研究。因此，研究胰島素樣生長因子-1與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中的作用是至關(guān)重要的。
　　目的:本課題采用免疫組織化學(xué)法（SP法）檢測胰島素樣生長因子-1和上皮性鈣黏連蛋白在上皮性卵巢癌、上皮性交界性卵巢腫瘤、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中的表達(dá)，應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR法及Western blot法檢測不同濃度胰島素樣生長因子-1作用于卵巢

6、癌SKOV3細(xì)胞后上皮性鈣黏連蛋白的表達(dá)變化，應(yīng)用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)法檢測不同濃度胰島素樣生長因子-1作用于卵巢癌 SKOV3細(xì)胞后侵襲力的改變，探討胰島素樣生長因子-1在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用，為進(jìn)一步研究上皮性卵巢癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.采用免疫組織化學(xué)法（SP法）檢測30例上皮性卵巢癌、10例上皮性交界性卵巢腫瘤、10例良性卵巢腫瘤及10例正常卵巢組織中IGF-1及E-cadherin

7、的蛋白表達(dá)量，以及IGF-1和E-cadherin在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)相關(guān)性。
　　2.體外培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，以不同濃度的IGF-1（0，25，50，100，200 ng/mL）刺激卵巢癌SKOV3細(xì)胞，應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR法及Western blot法檢測E-cadherin蛋白的表達(dá)量變化。
　　3.體外培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，以不同濃度的IGF-1（0，25，50，100，200 ng/mL）刺激

8、卵巢癌SKOV3細(xì)胞，采用Transwell法檢測細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:
　　1.IGF-1在上皮性卵巢癌組織、上皮性交界性卵巢組織、良性卵巢組織及正常卵巢組織中的陽性表達(dá)率分別為73.3％，30%，20%和10%，上皮性卵巢癌組IGF-1的表達(dá)顯著高于其他3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而后3組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.E-cadherin在上皮性卵巢癌組織、上皮性交界性卵巢組織、良性卵巢組織及正常卵巢組

9、織中的陽性表達(dá)率分別為36.7%，60%，70%和90%，上皮性卵巢癌組E-cadherin的表達(dá)顯著低于其他3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而后3組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.上皮性卵巢癌組織中 IGF-1和E-cadherin的陽性表達(dá)均與臨床分期，組織學(xué)分級、兩級分級系統(tǒng)相關(guān)，而與發(fā)病年齡、組織學(xué)類型無關(guān)，且在上皮性卵巢癌組織中IGF-1與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。
　　4.培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，應(yīng)用不

10、同濃度的IGF-1作用于卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，E-cadherin的表達(dá)量在mRNA水平及蛋白質(zhì)水平均隨IGF-1濃度的增加而逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，應(yīng)用不同濃度的IGF-1作用于卵巢癌 SKOV3細(xì)胞，隨著IGF-1的濃度增加，卵巢癌SKOV3細(xì)胞的侵襲能力逐漸增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.IGF-1在上皮性卵巢癌組織中為促癌因素，而E-cadherin