胰島素樣生長因子-1下調E-cadherin的表達促進卵巢癌侵襲轉移的機制研究.pdf

1、上皮性卵巢癌（EOC）是女性最常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其高死亡率的最主要原因是大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)已是晚期，且伴隨廣泛的腹腔轉移。對于上皮性卵巢癌患者而言，腫瘤的侵襲轉移是上皮性卵巢癌患者最主要的致死原因。腫瘤的侵襲轉移是一個相互作用相互影響的多步驟過程，首先最關鍵的一步是腫瘤細胞從原發(fā)腫瘤上分離并且侵入到周邊組織。在正常組織中，細胞彼此存在緊密連接、縫隙連接、細胞橋粒等連接方式固定細胞從而使細胞不能自由移動，但是，腫瘤細胞之間的連接方式

2、發(fā)生改變，使腫瘤細胞得以從原發(fā)病灶脫落，從而促進了腫瘤的侵襲轉移。目前研究發(fā)現(xiàn)，上皮間質轉化(EMT)影響上皮來源的腫瘤細胞的侵襲轉移。上皮間質轉化是指上皮細胞失去它們的上皮特性并且獲得典型的間質細胞的特性，上皮間質轉化不僅促進細胞的運動而且在物種進化過程中產(chǎn)生新的組織類型，甚至上皮間質轉化是疾病的發(fā)病機制。上皮間質轉化不僅是上皮細胞獲得間質細胞的表型特征，而且腫瘤細胞的分子標志物也會發(fā)生相應的改變，最典型的標志性變化是上皮性標記物上皮

3、性鈣黏連蛋白（E-cad）的表達下降或缺失。上皮性鈣黏連蛋白的基因位于染色體16q22.1，蛋白分子量是120kD，它是一個主要的細胞間黏附分子，其功能主要是維持上皮細胞之間的相互黏附并抑制細胞的自由移動，而上皮性鈣黏連蛋白表達下降或缺失導致細胞間的黏附能力減弱，細胞的運動能力增強。目前已有研究表明，在卵巢癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、食管癌、肺癌、甲狀腺癌等腫瘤中，上皮性鈣黏連蛋白的低表達與腫瘤細胞的侵襲轉移呈負相關，因此，可以認為

4、上皮性鈣黏連蛋白可以抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　胰島素樣生長因子-1(IGF-1)是一個由70個氨基酸組成的單鏈，它包括三個二硫鍵及四個結構域，分子量為7649kDa，它在調節(jié)細胞生長及新陳代謝等方面起重要作用。有研究表明胰島素樣生長因子-1在上皮性卵巢癌患者血清中表達增高，增加患上皮性卵巢癌的風險，促進上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展以及降低上皮性卵巢癌的預后，另外在乳腺癌、前列腺癌、胃癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子-1可以通過不同信號通路

5、誘導細胞發(fā)生上皮間質轉化，但是胰島素樣生長因子-1在上皮性卵巢癌中的作用尚未有研究。因此，研究胰島素樣生長因子-1與上皮間質轉化在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中的作用是至關重要的。
　　目的:本課題采用免疫組織化學法（SP法）檢測胰島素樣生長因子-1和上皮性鈣黏連蛋白在上皮性卵巢癌、上皮性交界性卵巢腫瘤、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中的表達，應用實時熒光定量PCR法及Western blot法檢測不同濃度胰島素樣生長因子-1作用于卵巢

6、癌SKOV3細胞后上皮性鈣黏連蛋白的表達變化，應用Transwell侵襲實驗法檢測不同濃度胰島素樣生長因子-1作用于卵巢癌 SKOV3細胞后侵襲力的改變，探討胰島素樣生長因子-1在上皮間質轉化中的作用，為進一步研究上皮性卵巢癌上皮間質轉化的機制奠定基礎。
　　方法:
　　1.采用免疫組織化學法（SP法）檢測30例上皮性卵巢癌、10例上皮性交界性卵巢腫瘤、10例良性卵巢腫瘤及10例正常卵巢組織中IGF-1及E-cadherin

7、的蛋白表達量，以及IGF-1和E-cadherin在上皮性卵巢癌組織中的表達相關性。
　　2.體外培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細胞，以不同濃度的IGF-1（0，25，50，100，200 ng/mL）刺激卵巢癌SKOV3細胞，應用實時熒光定量PCR法及Western blot法檢測E-cadherin蛋白的表達量變化。
　　3.體外培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細胞，以不同濃度的IGF-1（0，25，50，100，200 ng/mL）刺激

8、卵巢癌SKOV3細胞，采用Transwell法檢測細胞侵襲能力的變化。
　　結果:
　　1.IGF-1在上皮性卵巢癌組織、上皮性交界性卵巢組織、良性卵巢組織及正常卵巢組織中的陽性表達率分別為73.3％，30%，20%和10%，上皮性卵巢癌組IGF-1的表達顯著高于其他3組，差異有統(tǒng)計學意義，而后3組之間比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　2.E-cadherin在上皮性卵巢癌組織、上皮性交界性卵巢組織、良性卵巢組織及正常卵巢組

9、織中的陽性表達率分別為36.7%，60%，70%和90%，上皮性卵巢癌組E-cadherin的表達顯著低于其他3組，差異有統(tǒng)計學意義,而后3組之間比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　3.上皮性卵巢癌組織中 IGF-1和E-cadherin的陽性表達均與臨床分期，組織學分級、兩級分級系統(tǒng)相關，而與發(fā)病年齡、組織學類型無關，且在上皮性卵巢癌組織中IGF-1與E-cadherin表達呈負相關性。
　　4.培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細胞，應用不

10、同濃度的IGF-1作用于卵巢癌 SKOV3細胞，E-cadherin的表達量在mRNA水平及蛋白質水平均隨IGF-1濃度的增加而逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　5.培養(yǎng)卵巢癌 SKOV3細胞，應用不同濃度的IGF-1作用于卵巢癌 SKOV3細胞，隨著IGF-1的濃度增加，卵巢癌SKOV3細胞的侵襲能力逐漸增強，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1.IGF-1在上皮性卵巢癌組織中為促癌因素，而E-cadherin