基于6,9-二取代嘌呤衍生物設(shè)計、合成及其抗炎活性的初探.pdf

1、目的:
　　本論文以inhibitor3作為抗炎先導(dǎo)化合物，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了一系列6，9-二取代嘌呤二胺類衍生物，并對這一系列的化合物進(jìn)行體外抗炎活性的初步研究。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對所合成的嘌呤衍生物進(jìn)行炎癥因子抗炎活性檢測，并用Western blot初步探索化合物抗炎的作用機(jī)制。根據(jù)實驗結(jié)果，探究這一系列化合物的構(gòu)效關(guān)系，為進(jìn)一步抗炎活性的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.本文以6-氯嘌呤

2、為原料，合成2個系列20個6，9-二取代嘌呤二胺類衍生物。所合成的目標(biāo)化合物均通過ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。
　　2.采用Titer-Glo法檢測所合成的嘌呤衍生物對THP-1細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　3.采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)的檢測方法，在化合物濃度為10μM的條件下，檢測化合物對TNF-α和IL-1β的抑制作用，篩選出具有良好抗炎活性的化合物。
　　4.對篩選出具有良好抗炎活性

3、的化合物進(jìn)行深入的抗炎活性研究。分別在化合物濃度為2.5，5.0和10μM條件下，檢測化合物對炎癥因子IL-6、IL-1β、PGE2和TNF-α的抑制作用，探討化合物濃度對抑制作用的影響。同時，采用Griess法檢測化合物對NO的抑制作用。
　　5.采用Real-time qPCR分析COX-2和iNOS在mRNA水平的含量變化。
　　6.采用Westem blot法檢測相關(guān)通路蛋白的磷酸化水平以及相關(guān)酶的含量。
　　

4、結(jié)果:
　　1.本論文合成了兩類20個嘌呤化合物(L1-10、W1-10)，其中化合物L(fēng)2-L10是未見報道的新化合物。所合成的化合物均通過ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。
　　2.Titer-Glo實驗結(jié)果顯示:所合成的嘌呤類衍生物在10μM的條件下，對THP-1細(xì)胞幾乎不具有毒性。
　　3.化合物抗炎活性初篩實驗顯示:在化合物濃度為10μM的條件下，化合物L(fēng)1，L4，W2和W4對炎癥因子TN

5、F-α和IL-1β具有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率達(dá)到70-87％，其中化合物L(fēng)1對TNF-α和IL-1β更是達(dá)到86.12％和86.17％，其抑制作用已經(jīng)超過抗炎先導(dǎo)化合物inhibitor3。
　　4.對特定化合物進(jìn)行深入活性研究顯示:化合物L(fēng)1、L4、W2和W4對炎癥因子IL-6、IL-1β、PGE2、TNF-α和NO均具有良好的抗炎活性，且呈現(xiàn)一定的線性關(guān)系，并且能夠降低COX-2和iNOS的表達(dá)。Westem blot實驗顯示

6、:化合物L(fēng)1、L4、W2和W4能通過抑制LPS誘導(dǎo)的MAPK和NF-κB炎癥信號通路上的關(guān)鍵酶從而起到抗炎的效果。
　　結(jié)論:
　　綜上所述，本論文對inhibitor3進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，設(shè)計出一些列的6，9-二取代嘌呤衍生物，并通過化合物抗炎活性篩選，得到了具有較強(qiáng)抗炎活性化合物L(fēng)1、L4、W2和W4。其中當(dāng)嘌呤6號位接間氯芐胺，9號位接氫原子所形成的化合物L(fēng)1抗炎活性最強(qiáng)，超過了抗炎先導(dǎo)化合物inhibitor3，而且Tit