抑藻表面活性劑產(chǎn)生菌的高通量篩選及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、赤潮是一種嚴(yán)重的全球性海洋災(zāi)害，它會造成嚴(yán)重的生態(tài)、資源、環(huán)境問題和重大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來，赤潮發(fā)生次數(shù)增多，發(fā)生區(qū)域擴(kuò)大，赤潮危害加劇。因此，尋求有效的赤潮防治方法成為當(dāng)務(wù)之急。海洋細(xì)菌在赤潮生消過程中有著極其重要的作用，而細(xì)菌殺藻現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)也為微生物防治赤潮提供了新的可能途徑，“菌藻關(guān)系”研究已經(jīng)成為當(dāng)前赤潮研究的重點和熱點。
　　 本論文選取典型有害赤潮藻——錐狀斯氏藻（Scrippsiellatrochoidea）作為主

2、要研究藻種，基于高通量培養(yǎng)-篩選方法，從實驗室保存的東海海域赤潮高發(fā)區(qū)分離菌株中篩選到能產(chǎn)表面活性物質(zhì)的3株海洋殺藻細(xì)菌。研究了其中1株殺藻菌發(fā)酵條件，并對其分泌的殺藻表面活性物質(zhì)的分離純化進(jìn)行了初步研究。本文選取乳化效果最好的菌株Halomonossp.DH77-1，以乳化活性為導(dǎo)向從其發(fā)酵液提取物中分離、純化具有殺藻活性的化合物。主要結(jié)論如下:
　　 1.整合高通量培養(yǎng)和液滴崩塌表面活性劑產(chǎn)生菌篩選法，建立了表面活性劑產(chǎn)生菌

3、的高通量篩選流程。采用該方法從實驗室保存的300余株東海海域赤潮高發(fā)區(qū)所分離到的菌株中篩選獲得3株產(chǎn)表面活性劑海洋細(xì)菌，經(jīng)鑒定分屬于鹽單胞菌屬（Halomonas）和芽孢桿菌屬(Bacillus)，其中Halomonassp.DHQ19發(fā)酵液具有優(yōu)良的乳化活性，其24h乳化指數(shù)EI24(emulsificationindex)高達(dá)69％。
　　 2.采用單因子優(yōu)化方法對菌株Halomonassp.DHQ19合成乳化活性物質(zhì)的發(fā)酵

4、條件進(jìn)行了初步優(yōu)化。考察了氮源、碳源、鎂、鹽度、初始pH，裝液量，發(fā)酵時間等因素對Halomonassp.DHQ19發(fā)酵液乳化活性的影響。初步確定發(fā)酵培養(yǎng)基為:甘露醇10g，谷氨酸0.6g，硫酸銨2g，磷酸二氫鉀2g，磷酸氫二鉀5g，七水合硫酸鎂1g，氯化鈉8g，pH7.5，蒸餾水定容至1L;培養(yǎng)條件為:轉(zhuǎn)速150rpm，裝液量1/5，30℃培養(yǎng)72h。
　　 3.采用多級醇析法、超濾法和DEAE-瓊脂糖離子柱層析法對發(fā)酵液中的