負載順鉑金納米粒子抗惡性黑素瘤的體內(nèi)外效應.pdf

1、惡性黑素瘤起源于黑素細胞，是一種惡性度極高的皮膚腫瘤。轉(zhuǎn)移黑素瘤患者的平均存活時間只有6-10個月，10年生存率不到10％。治療轉(zhuǎn)移性黑素瘤的方法有化療、放療、免疫治療和靶向治療等，但目前的效果不理想，主要原因是藥物毒副作用大、藥物難以到達腫瘤部位和耐藥性，療效不顯著。順鉑（cisplatin）在上世紀70年代就被發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤細胞的生長，現(xiàn)在廣泛應用于晚期腫瘤包括黑素瘤的治療，但副作用很大。眾所周知，腫瘤組織中存在“增強滲透和保留（

2、EPR）效應”和酸性環(huán)境。金納米粒子（AuNP）可作為小分子藥物的運載載體粒子，使抗癌藥物到達特定的腫瘤部位發(fā)揮作用；由于EPR效應，負載藥物的金納米粒子可以在腫瘤內(nèi)進行選擇性積累，提高藥物的治療效果。同時，腫瘤酸性微環(huán)境也為藥物的可調(diào)控釋放提供了前提基礎，減少藥物毒副作用?；谏鲜鰞?yōu)勢，我們課題組設計制備出具有pH敏感性的、負載順鉑的金納米粒子，體內(nèi)外觀察該納米粒子治療惡性黑素瘤的效果。
　　目的：設計制備出具有pH敏感性的、負

3、載順鉑的金納米粒子，探討其在體外實驗中對人惡性黑素瘤 M14細胞的殺傷作用，以及在體內(nèi)實驗中對黑素瘤裸鼠移植瘤的抑制效應。
　　方法：1.制備Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子：用種子生長法合成金納米粒子，并將其PNIPAm-PEG化，成功鏈接順鉑，合成Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子。通過透射電鏡（TEM）、紫外分光光度計、電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）等表征了金納米粒子（AuNP

4、）和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子的尺寸和形態(tài)、吸收光譜及檢測了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子中順鉑的濃度；
　　2.體外實驗：先將少量異硫氰酸熒光素（FITC）熒光探針偶聯(lián)到納米粒子表面的PNIPAm末端，用熒光顯微鏡在體外觀察黑素瘤細胞（M14）攝取Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子的情況；通過TEM進一步觀察Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米

5、粒子在M14細胞的胞內(nèi)分布；并用MTT檢測了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子對M14細胞的毒性作用；
　　3.體內(nèi)實驗：建立人黑素瘤裸鼠移植瘤模型；通過從移植瘤內(nèi)注射Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子20天，記錄移植瘤的生長過程，測量移植瘤的體積、重量，在此基礎上得到裸鼠的生存曲線和監(jiān)測裸鼠體重；觀察不同治療組裸鼠的主要器官和移植瘤組織學改變；通過TEM觀察Au-PNIPAm-PEG-ci

6、splatin納米粒子在移植瘤細胞內(nèi)的分布。
　　結(jié)果：1.AuNP和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子分散性好，AuNP直徑為8.0±0.8 nm，Au-PNIPAm-PEG-cisplatin中順鉑的濃度為100.55μM；
　　2.Au-PNIPAm-PEG-cisplatin進入M14細胞后，主要分布在胞漿、胞內(nèi)體或溶酶體；與M14細胞作用48 h和72h時，Au-PNIPAm-PEG-cispl

7、atin的IC50是游離順鉑的1.7倍和1.5倍，未載順鉑的Au-PNIPAm-PEG對M14細胞沒有毒性；
　　3.Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組和游離順鉑抑瘤率分別為76.29％和66.41％；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組荷瘤裸鼠存活時間長于生理鹽水組和無順鉑納米粒子組；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組的病理組織顯示移植的黑素瘤無轉(zhuǎn)移；Au-PNIP