納米銀顆粒對血腦屏障的影響及其對神經(jīng)元毒性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、納米銀具有優(yōu)異的長效廣譜抗菌活性,是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最早、最廣泛的納米材料之一,已被廣泛應(yīng)用于各種護(hù)理產(chǎn)品和醫(yī)療器械。由于納米抗菌材料在使用過程中,大多是與人體組織或細(xì)胞相互作用,所以必須考慮到它對內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元等細(xì)胞的毒性。另外,與其它的生物材料相比,納米銀本身具有粒徑小、表面活性高以及吸附能力強(qiáng)等一些特殊的理化性質(zhì),岡此,更容易通過細(xì)胞問隙進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)中細(xì)胞器相互作用;還可能通過一些特殊的生理屏障,積蓄到深部組織,引起細(xì)胞

2、和組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)的改變。所以本研究主要研究了納米銀顆粒對血腦屏障的影響及其引起的神經(jīng)元細(xì)胞毒性。
   本課題首先了解納米銀顆粒是否能夠通過血腦屏障,對其血腦屏障通過率是否存在劑量-效應(yīng)關(guān)系?為此,第一步先進(jìn)行了BMVEC和AC兩種原代細(xì)胞共同培養(yǎng)建立血腦屏障體外模型,并通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和跨膜電阻值兩種方法對模型進(jìn)行驗證。結(jié)果顯示所建立的血腦屏障模型的細(xì)胞間致密性高,其結(jié)構(gòu)和形態(tài)與體內(nèi)狀態(tài)的血腦屏障相似;可以用于進(jìn)一步

3、的研究。之后,再運用建立的體外血腦屏障模型,對不同濃度的銀粒子通過BBB體外模型的能力進(jìn)行了研究,計算了納米銀顆粒對BBB的通過率,并采用透射電鏡進(jìn)行BBB細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察,檢測不同濃度的納米銀顆粒對BBB的損傷、對細(xì)胞間緊密連接程度的破壞。結(jié)果顯示當(dāng)納米銀顆粒劑量小于50μg/ml時,納米銀顆?;静荒芡高^BBB,但之后隨后隨劑量增加,會有較多的納米銀顆粒通過血腦屏障。當(dāng)濃度在50-200μg/ml時,納米銀顆粒進(jìn)入BBB細(xì)胞內(nèi)和通過

4、BBB的能力呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系,隨著劑量再增加,對細(xì)胞損害程度增加,即納米銀顆粒能通過胞飲進(jìn)入到BMVEC和AC細(xì)胞內(nèi)并引發(fā)細(xì)胞水腫,劑量越大,細(xì)胞受損越嚴(yán)重,構(gòu)成BBB主要屏障功能的血管內(nèi)皮細(xì)胞問的緊密連接也會被破壞的越嚴(yán)重,就會有越多的納米銀顆粒通過BBB。本研究結(jié)果證明納米銀顆??梢云茐牟⑼ㄟ^血腦屏障,提示必須對其可能引起的腦毒性給予足夠的重視。
   在本課題第一部分的基礎(chǔ)上,又進(jìn)一步研究了納米銀顆粒對腦神經(jīng)元的細(xì)胞毒性

5、。在本部分研究中,首先進(jìn)行神經(jīng)元原代培養(yǎng)以供體外細(xì)胞毒性研究使用。然后進(jìn)行了不同劑量納米銀顆粒對神經(jīng)元細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),來探索納米銀顆粒引起神經(jīng)元細(xì)胞毒性的原因。結(jié)果表明,不同濃度的納米銀顆粒對體外細(xì)胞毒性試驗結(jié)果有明顯的影響;當(dāng)納米銀濃度小于25μg/ml時,細(xì)胞RGR均大于90%,細(xì)胞毒性較小;當(dāng)納米銀濃度在25-250μg/ml的濃度范圍內(nèi)時,納米銀顆粒的濃度與神經(jīng)元細(xì)胞的增殖率呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。電鏡觀察結(jié)果表明:小于25μg/ml

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