四溴雙酚A對(duì)櫛孔扇貝毒性效應(yīng)與污染監(jiān)測技術(shù)的研究.pdf

1、四溴雙酚A(tetrabisphenol A)是目前世界上產(chǎn)量和使用量最大的一種溴系阻燃劑。這種阻燃劑可以被作為反應(yīng)型阻燃劑（超過90％）添加到印刷電路板和作為添加型阻燃劑混合入塑料合成物中。由于其廣泛使用，并能夠從產(chǎn)品中釋放到環(huán)境中，目前在全球范圍內(nèi)的環(huán)境介質(zhì)中普遍存在。TBBPA由于與甲狀腺激素結(jié)構(gòu)類似，是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物。此外，它還被證實(shí)具有神經(jīng)毒性、內(nèi)分泌毒性、腎毒性和肝毒性等。本文根據(jù)我國近海環(huán)境TBBPA污染狀況，以櫛

2、孔扇貝（Chlamys farreri）為研究對(duì)象，研究了櫛孔扇貝在TBBPA脅迫下的多種毒性效應(yīng)，構(gòu)建了TBBPA在櫛孔扇貝體內(nèi)生理毒代-毒效動(dòng)力學(xué)模型，建立了快速檢測TBBPA濃度的酶聯(lián)免疫方法，對(duì)青島近海海域進(jìn)行了為期一年的生物監(jiān)測工作，為TBBPA對(duì)海洋生物的毒性機(jī)制研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，并為海洋TBBPA的污染監(jiān)測（檢測）提供了技術(shù)支持。
　　1、櫛孔扇貝在TBBPA脅迫下毒性效應(yīng)的研究
　　本章首先研究了TBBPA

3、對(duì)櫛孔扇貝的餌料藻，小新月菱形藻（Nitzschiaclosteriumf.minutissima）的毒性效應(yīng)，結(jié)果顯示TBBPA能快速地在小新月菱形藻細(xì)胞內(nèi)累積，并能顯著誘導(dǎo)SOD、GST酶的活力和GSH含量的增加。其次，通過食物和海水+食物兩種暴露方式用TBBPA對(duì)櫛孔扇貝染毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)海水途徑是櫛孔扇貝吸收TBBPA的主要方式（占總吸收量的92％左右），單純食物途徑TBBPA染毒也能夠?qū)笨咨蓉惤M織的解毒代謝指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響。然后

4、，設(shè)置TBBPA暴露濃度為0.2、0.4和0.8 mg/L，通過海水十食物途徑對(duì)櫛孔扇貝進(jìn)行染毒10d，緊接著進(jìn)行10d的消除實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示櫛孔扇貝能夠快速吸收和代謝TBBPA，TBBPA脅迫能夠激活機(jī)體的抗氧化防御體系，并能顯著誘導(dǎo)GST、UGT和SULT等二相代謝酶的活力，高濃度的TBBPA導(dǎo)致的脂質(zhì)和DNA損傷在短時(shí)間內(nèi)難以修復(fù)。
　　2、櫛孔扇貝在TBBPA脅迫下的數(shù)字基因表達(dá)譜分析
　　本研究使用Illumina的

5、數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)(DGE)，考察了在TBBPA脅迫下櫛孔扇貝消化盲囊組織的轉(zhuǎn)錄響應(yīng)。結(jié)果總共分別發(fā)現(xiàn)了173條顯著上調(diào)的基因和266條顯著下調(diào)的基因?；贕O分類系統(tǒng)和KEGG數(shù)據(jù)庫的功能分析發(fā)現(xiàn)TBBPA顯著改變了與應(yīng)激響應(yīng)、解毒代謝、抗氧化和免疫功能有關(guān)基因的表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)了TBBPA干擾甲狀腺內(nèi)分泌系統(tǒng)的證據(jù)。熒光定量實(shí)驗(yàn)用來確認(rèn)DGE分析結(jié)果的準(zhǔn)確與可靠。這些結(jié)果為研究TBBPA對(duì)雙殼貝類的分子毒性機(jī)制提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

6、　　3、TBBPA污染監(jiān)測（檢測）技術(shù)的研究
　　基于相關(guān)性分析的結(jié)果，選取酶活力和損傷效應(yīng)的生物標(biāo)志物SOD、GST、GSH和LPO等作為毒效指標(biāo)與TBBPA在櫛孔扇貝組織里的動(dòng)態(tài)分布結(jié)合起來，構(gòu)建生理毒代-毒效動(dòng)力學(xué)模型，能夠?qū)笨咨蓉愺w內(nèi)TBBPA的吸收、分布、代謝、排出與生物組織的標(biāo)志物響應(yīng)偶聯(lián)起來。
　　將不具有抗原活力的小分子有機(jī)污染物TBBPA與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制成人工抗原免疫大鼠，獲得免疫抗原。優(yōu)化反

7、應(yīng)條件，建立了用于快速檢測海洋環(huán)境TBBPA含量的間接酶聯(lián)免疫方法。此方法檢測速度快、靈敏度高，交叉干擾小。該方法的線性檢測范圍為0.1-100 ng/mL。
　　4、基于櫛孔扇貝青島近海污染生物監(jiān)測研究
　　2014年選擇青島近海區(qū)域靈山衛(wèi)(S1)、海泊河口(S2)和沙子口(S3)三個(gè)站點(diǎn)進(jìn)行污染調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PAHs和重金屬類:海泊河口＞沙子口＞靈山衛(wèi);TBBPA:海泊河口＞靈山衛(wèi)＞沙子口。主成分分析發(fā)現(xiàn)MT含量變化對(duì)于