谷胱甘肽的合成及其檢測技術研究.pdf

1、本論文對谷胱甘肽(GSH)的酶法合成及其過程檢測進行了實驗研究，主要研究內容和結果如下：
　　(1)研究半胱氨酸(Cys)干擾對于合成GSH四氧嘧啶法檢測的影響，開發(fā)一種新的適用酶法合成GSH過程檢測技術。通過設計干擾實驗，探討復雜的干擾現象形成的原因，首次提出GSH、Cys與四氧嘧啶反應生成的H2O2和半胱氨酸中的巰基共同干擾了GSH的檢測。研究設計干擾模型和抗干擾補償機制，結合自動化計算，建立一種新型GSH抗干擾快速檢測技術。

2、結果顯示，新的四氧嘧啶補償法的GSH濃度-吸光度標準方程為y=3.0629x+0.0001，R2=0.9999；經實驗驗證，當干擾底物Cys濃度為GSH濃度的4倍以下時，檢測GSH、Cys的回收率分別達到95％～100%和78%~120%。相比四氧嘧啶法，四氧嘧啶補償法顯著增強了抗干擾能力，并同時滿足定量檢測GSH和半定量檢測Cys的目的。
　　(2)GSH合成的跟蹤實驗，確定較優(yōu)酵母添加量和反應時間。以GSH產量為考察指標，較優(yōu)

3、的合成反應條件為酵母添加量1.5g且反應時間為5h，此時酶法合成的GSH產物濃度達到峰值。
　　(3)反應液中前體配方的優(yōu)化實驗。以GSH產量和前體轉化率為考察指標，設計單因素實驗和正交試驗，結果表明，對于GSH產量，Cys影響極顯著，Glu、Gly影響顯著，且影響順序為Cys>Glu>Gly；對于前體轉化率，Cys影響顯著，Glu、Gly影響不顯著，且影響順序為Cys>Glu>Gly。經實驗驗證，得出4mM Cys、12mM G

4、lu和50mM Gly為優(yōu)化組合，前體轉化率比對照組(Glu20mM、Cys15mM和Gly40mM)提高112.17%。
　　(4)利用H2O2脅迫促進GSH合成的研究。在反應過程中定點添加H2O2的實驗中，1～3mM H2O2在2～4h加入均提高了酶催化合成GSH的轉化率，而0h加入不利于GSH合成。進一步設計采用單點、兩點和三點的添加策略實驗，結果顯示H2O2最佳的添加策略為在4h時加入H2O2至1mM濃度，經實驗驗證，前體