河套蜜瓜PLD基因的克隆及磁場(chǎng)處理對(duì)其生理生化特性的影響.pdf

1、河套蜜瓜（Cucumis melo L. cv Hetao）是內(nèi)蒙古河套地區(qū)優(yōu)良的地方品種，目前對(duì)河套蜜瓜保鮮的研究主要集中在保鮮劑的篩選方面，以交變磁場(chǎng)作為河套蜜瓜的保鮮方法未見報(bào)道。此外，磷脂酶D（phospholipase D，PLD）在果蔬保鮮過程中具有重要作用，通過對(duì)PLD的調(diào)控，可以延長(zhǎng)河套蜜瓜的保鮮時(shí)間。
　　本論文以河套蜜瓜為實(shí)驗(yàn)材料，采用 RT-PCR技術(shù)克隆得到了河套蜜瓜 PLD cDNA全長(zhǎng)。然后采用生物信息

2、學(xué)方法對(duì)其序列結(jié)構(gòu)和氨基酸序列進(jìn)行了分析，對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)，并且進(jìn)行了氨基酸序列的多重比對(duì)和系統(tǒng)樹的建立。另外，還對(duì)不同的時(shí)間磁場(chǎng)處理下河套蜜瓜 PLD基因的表達(dá)量以及一些生理指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定，主要包括 PLD活性、呼吸強(qiáng)度、還原糖含量、可溶性蛋白含量、失重率、可溶性固形物含量、維生素C含量和電導(dǎo)率。主要結(jié)論如下：
　?。?）采用RT-PCR方法克隆得到了河套蜜瓜PLD全長(zhǎng)，其中包含開放閱讀框2424 bp，編碼了8

3、07氨基酸，分子量大小為92.13297 kDa，等電點(diǎn)為6.48。
　　（2）預(yù)測(cè)河套蜜瓜 PLD氨基酸序列結(jié)構(gòu)表明，其二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為無規(guī)則卷曲（37.55%），α-螺旋（26.64%），伸展鏈（23.67%），β-轉(zhuǎn)角（12.14%）；
　　（3）河套蜜瓜 PLD氨基酸序列結(jié)構(gòu)特點(diǎn)顯示，一個(gè) C2結(jié)構(gòu)域、兩個(gè)H×K××××D基序和一個(gè)IYIENQFF基序。兩個(gè)H×K××××D基序之間相隔320個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)出的三級(jí)結(jié)構(gòu)包

4、含兩個(gè)H×K××××D基序和一個(gè)IYIENQFF基序。
　　（4）系統(tǒng)進(jìn)化樹和氨基酸多重比對(duì)結(jié)果均顯示河套蜜瓜與甜瓜同源性最高，達(dá)99%。
　?。?）不同的磁場(chǎng)處理時(shí)間下河套蜜瓜PLD表達(dá)量均低于對(duì)照組，且處理5 min PLD表達(dá)量最低。
　　（6）測(cè)定了不同的磁場(chǎng)處理時(shí)間下河套蜜瓜的 PLD活性、呼吸強(qiáng)度、還原糖含量、可溶性蛋白含量、失重率、可溶性固形物含量、維生素 C含量和電導(dǎo)率，結(jié)果顯示數(shù)據(jù)呈現(xiàn)波動(dòng)性變化，說明