奶牛舍空氣微生物快速計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)與優(yōu)化.pdf

1、中國在乳制品生產(chǎn)食用方面位于世界前列，但近些年來，乳制品安全問題發(fā)生日益頻繁，其中，微生物污染是原料奶生產(chǎn)過程中重要的污染源，不僅對乳制品質(zhì)量和奶牛本身健康造成影響，更對我國消費(fèi)者人身健康存在重大威脅，因而原料奶生產(chǎn)過程中的質(zhì)量和安全日益受到企業(yè)和研究人員的關(guān)注。為保障原料奶衛(wèi)生健康安全，提高微生物計(jì)數(shù)檢測速率，縮短微生物計(jì)數(shù)時(shí)間。本課題針對哈爾濱周邊奶牛場配合微生物空氣采樣器進(jìn)行四季空氣采樣，并采用基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜法進(jìn)行鑒

2、定，鑒定結(jié)果得出四季檢出率最高的致病菌分別屬于芽孢桿菌屬（Bacillus）:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus);腸球菌屬(Enterococcus):糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌(Enterococcusfaecium);葡萄球菌屬（Staphylococcus）:木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）、產(chǎn)色葡萄球菌

3、(Staphylococcus chromogenes);不動桿菌屬（Acinetobacter）:洛菲不動桿菌(Acinetobacter lwoffii)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii);棒狀桿菌屬（Corynebacterium）:結(jié)膜干燥棒狀桿菌（Corynebacterium xerosis）。所得結(jié)果與國內(nèi)外研究報(bào)道基本相一致。
　　本研究以這9種代表性致病菌為研究對象，參考國內(nèi)外計(jì)數(shù)培

4、養(yǎng)基營養(yǎng)成分在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加酵母浸出粉及葡萄糖，并用胰蛋白胨替代蛋白胨，制成基底培養(yǎng)基。優(yōu)化后基底培養(yǎng)基配比為:胰蛋白胨10g/L，葡萄糖13 g/L，酵母浸出粉10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L。
　　在基底培養(yǎng)基基礎(chǔ)上用涂布計(jì)數(shù)法篩選出促代表菌共同生長的營養(yǎng)物質(zhì):甘露醇、丙酮酸鈉、硫酸鎂、生物素及西紅柿汁。單因素法確定各促生長物質(zhì)的適宜濃度范圍，再采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法對比促生長物質(zhì)之間關(guān)系，優(yōu)化各促生長物

5、質(zhì)濃度，最終確定培養(yǎng)基配比制成快速計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，從而縮短空間微生物的計(jì)數(shù)時(shí)間并提高計(jì)數(shù)效率?？焖儆?jì)數(shù)培養(yǎng)基添加促生長物質(zhì)結(jié)果為:甘露醇、硫酸鎂、丙酮酸鈉、生物素及西紅柿汁。以此培養(yǎng)基對代表菌采用涂布計(jì)數(shù)方法，恒溫培養(yǎng)10h可計(jì)數(shù)，菌落計(jì)數(shù)可達(dá)1.28×109CFU/mL。應(yīng)用其與空氣采樣器配合使用，奶牛場實(shí)際采回樣品培養(yǎng)24h即可計(jì)數(shù)，與常規(guī)48h計(jì)數(shù)比較無差異，且為NA培養(yǎng)基計(jì)數(shù)時(shí)間的一半。達(dá)到了快速計(jì)數(shù)的目的，填補(bǔ)國內(nèi)外空間微生物快速