微生物的計(jì)數(shù)——血球計(jì)數(shù)板法

1、微生物的計(jì)數(shù)微生物的計(jì)數(shù)——血球計(jì)數(shù)板法血球計(jì)數(shù)板法【摘要】摘要】測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，有分光光度法、顯微直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。分光光度法比較簡(jiǎn)便，易操作，但是會(huì)使數(shù)據(jù)嚴(yán)重偏大。而平板計(jì)數(shù)法則會(huì)使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)嚴(yán)重偏小。顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計(jì)數(shù)板，一般細(xì)菌則采用彼得羅夫霍澤（PetrofHausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板。兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件相同，

2、只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計(jì)數(shù)板下部的細(xì)菌不易看清。本實(shí)驗(yàn)采用血球計(jì)數(shù)板法，主要目的是了解血球計(jì)數(shù)板法的構(gòu)造和使用方法，學(xué)會(huì)用血球計(jì)數(shù)板對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求1、了解微生物計(jì)數(shù)常用的三種方法：分光光度法；平板計(jì)數(shù)法；血球計(jì)數(shù)板法。2、了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造和使用方法。3、學(xué)會(huì)用血球計(jì)數(shù)板對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。二、基本原理二、基本原理利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)

3、數(shù)，是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速。將經(jīng)過適當(dāng)稀釋的菌懸液（或孢子懸液）放在血球計(jì)數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（0.1mm2），所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法。血球計(jì)數(shù)板，通常是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各

4、刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室，微生物的計(jì)數(shù)就在計(jì)數(shù)室中進(jìn)行。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1）菌種：釀酒酵母菌2）用品：顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、酒精燈、蓋玻片、接種環(huán)、番紅染液、膠頭滴管。四、實(shí)驗(yàn)方法四、實(shí)驗(yàn)方法1、實(shí)驗(yàn)流程圖2、實(shí)驗(yàn)步驟1）鏡檢計(jì)數(shù)室：在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。2）將釀酒酵母菌懸液進(jìn)

5、行適當(dāng)稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。3)取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。然后在顯微鏡下找到計(jì)數(shù)室。若計(jì)數(shù)室沾有雜質(zhì)或者菌體，要用蒸餾水沖洗計(jì)數(shù)板，用濾紙吸干其上的水分。然后再放到顯微鏡下找到計(jì)數(shù)室。4)將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。5)靜置片刻，先在低倍鏡下找

6、到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。6)計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)大方格組成，按對(duì)角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個(gè)大方格外，還需數(shù)中央l個(gè)大方格的菌數(shù)（即80個(gè)小格）。如菌體位于大方格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。本實(shí)驗(yàn)采用25格16格的血球計(jì)數(shù)板。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)數(shù)5個(gè)大