砧用辣椒青枯病抗性分子標(biāo)記研究.pdf

1、青枯病是世界性土傳病害，可危害多種作物，尤其是茄科作物。近年來(lái)，嫁接栽培技術(shù)的推廣應(yīng)用對(duì)茄果類蔬菜防治土傳病害和提高產(chǎn)量發(fā)揮了很大的作用。生產(chǎn)上對(duì)抗性砧木需求量大，開展青枯病抗性砧木選育具有重要意義。
　　本研究通過(guò)分離鑒定青枯病菌，用青枯病菌對(duì)砧用辣椒種質(zhì)資源進(jìn)行室內(nèi)人工接種，鑒定砧用辣椒種質(zhì)對(duì)青枯病的抗性表型，再結(jié)合田間自然病圃接種試驗(yàn)，篩選出不同抗性親本進(jìn)行雙列雜交，分析抗性雜種優(yōu)勢(shì)，探討砧用辣椒種質(zhì)對(duì)青枯病的抗性遺傳規(guī)律。

2、構(gòu)建F2群體，采用分離分組混合分析法(BSA)篩選SSR和ISSR分子標(biāo)記，分析標(biāo)記與抗性基因的連鎖關(guān)系，為利用分子標(biāo)記技術(shù)輔助辣椒抗青枯病砧木育種提參考。研究結(jié)果如下:
　　1、選用特異性引物Y2/OLI1對(duì)從感病辣椒植株上分離的青枯病菌總DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，得到特異條帶，回收PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)過(guò)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，得到長(zhǎng)288bp的序列與茄科雷爾氏菌（Ralstonia solanaeearum）菌株EP1

3、(登錄號(hào)為CP015116.1)具有99％的同源性，確定分離到的菌株為茄科雷爾氏菌，表明采用引物Y2/OLI1進(jìn)行PCR擴(kuò)增能夠有效準(zhǔn)確檢測(cè)辣椒青枯病菌。
　　2、對(duì)15份砧用辣椒種質(zhì)進(jìn)行青枯病抗性鑒定，結(jié)果表明不同砧木對(duì)青枯病的抗性差異顯著。其中有2份種質(zhì)表現(xiàn)高抗(HR)，1份種質(zhì)表現(xiàn)抗病(R)，3份種質(zhì)表現(xiàn)中抗(MR)，1份種質(zhì)表現(xiàn)感病(S)，其余表現(xiàn)高感(HS)。田間病圃接種鑒定結(jié)果表明，種質(zhì)F06、G16、D16、D36的

4、抗性水平分別為抗病(R)、中抗(MR)、感病(S)、高感(HS)，與室內(nèi)接種鑒定一致。
　　3、以病情指數(shù)分析抗病性雜種優(yōu)勢(shì)，四個(gè)不同抗性砧木種質(zhì)組配的12個(gè)F1組合中，有2個(gè)組合(D16×D36和G16×F06)表現(xiàn)負(fù)向超高親優(yōu)勢(shì)，占參試組合數(shù)的16.6％;有5個(gè)組合（D16×D36，G16×D36，G16×F06，F(xiàn)06×D16和F06×D36）表現(xiàn)負(fù)向超中親優(yōu)勢(shì)，占參試組合數(shù)的41.7％;其余組合表現(xiàn)正向超中親優(yōu)勢(shì)，占參試組

5、合數(shù)的41.7％。表明辣椒砧木對(duì)青枯病抗性的雜種優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)較為復(fù)雜，在選配親本時(shí)，選擇抗性水平相同的雙親可選育出抗性強(qiáng)的雜交組合。
　　4、以抗青枯病種質(zhì)F06和感青枯病種質(zhì)D36為親本進(jìn)行正反交，分別獲得正反交F1代、F2代，經(jīng)分析發(fā)病情況和病情指數(shù)，表明砧用辣椒種質(zhì)F06對(duì)青枯病的抗性表達(dá)受細(xì)胞質(zhì)基因調(diào)控，并存在加性效應(yīng)。
　　5、采用群體分離法，構(gòu)建抗感青枯病的F2分離群體，進(jìn)行SSR和ISSR分子標(biāo)記篩選研究。從113