花生青枯病抗性相關基因的分離及其功能分析.pdf

1、IsolationandanalysisofdifferentiallyexpressedgenesfrompeanutinresponsetochallengewithRalstoniasolanacearumThesissubmittedtoQingdaoAgricultural1rI‘Un1VerS1tVInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceDingYu

2、fei(CollegeofLifeSciences)Supervisor：WangChuantangQingdaoChinaJune，2012青島農業(yè)大學碩士學位論文摘要花生青枯病抗性相關基因的分離及其功能分析摘要由Ralstoniasolanacearum引起的花生青枯病是我國花生上的一種毀滅性病害。通過輪作、化學藥劑和生物防治能夠在一定程度上預防青枯病的發(fā)生，但是這些方法浪費土地資源，并且增加了種植成本。選育和種植抗青枯病花生品種是

3、目前最為經濟有效的防治途徑。青枯病抗性育種主要有兩條途徑：一是對現有花生種質進行抗性鑒定，從中篩選出抗病、高產的品種直接加以利用；二是將現有抗源與當前主栽品種雜交，轉移其抗性，培育抗青枯病新品種。但是受抗源種質遺傳基礎和篩選方法的限制，傳統(tǒng)的育種手段難以滿足生產需要。近年來隨著分子生物學的發(fā)展，花生青枯病抗性育種也朝著分子水平邁進，分子標記和抗性基因分離等技術的運用有助于加速花生青枯病抗性育種進程?；ㄉ耘喾N基因組龐大，且含有較多重復序

4、列。雖然近年來有不少關于花生青枯病抗性基因分子標記的報道，但是這些分子標記與抗性間的圖距較大，實用價值不大。而差異表達分析能夠在短時間內獲得抗性相關基因，可望在育種上加以應用。本研究主要涉及花生青枯菌的遺傳多樣性分析以及花生青枯病抗性相關基因的分離，具體研究內容和結果如下：l、用SMSA培養(yǎng)基從青枯病罹病花生植株莖中分離青枯菌。具有強致病性的菌株在SMSA培養(yǎng)基上，形成不規(guī)則、中間為粉紅色、具有很強的流動性的菌落。挑取典型菌落，并利用青

5、枯菌種特異性引物759／760對其進行鑒定。若擴增結果為一條280bp的單一條帶，則說明分離得到的菌是具有致病性的青枯菌菌株。本研究中共分離得到11個青枯菌菌株。2、對分離得到的青枯菌進行生物型和遺傳型鑒定分析。根據Fegan和Prior提出的PmxPCR對分離得到的菌株進行遺傳型分析。根據青枯菌對于三種雙糖和三種己醇的利用情況，對其進行生物型劃分。經分析，分離得到的11個菌株均是生物型III、遺傳型I。3、以抗青枯病花生品種日花l號和