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文檔簡介
1、該研究利用基因重組技術(shù)成功克隆了結(jié)核桿菌KatG基因,在此基礎(chǔ)上采用三步PCR法對KatG基因的6個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行了定向誘變.這6個(gè)位點(diǎn)均是在臨床菌株中篩查到的,其中2個(gè)為國外報(bào)道(S315T、W321Q),4個(gè)為國內(nèi)首次報(bào)道(R418Q、P441L、A456S和A476V).后4個(gè)基因的意義尚未見深入的研究.此后,該課題又實(shí)現(xiàn)了這些重組蛋白的表達(dá)和純化.通過該部分工作建立了快速穩(wěn)定的誘變體系和重組KatG蛋白純化體系,為進(jìn)一步研究點(diǎn)突變對K
2、atG蛋白結(jié)構(gòu)和功能的影響,探討INH耐藥機(jī)制奠定基礎(chǔ).在第二部分研究中,作者對前面所得野生型KatG和誘變型KatG重組蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,測定了這些蛋白的過氧化氫-過氧化物酶活性,二聚體的形成情況和熒光光譜的變化.通過這些工作明確了6個(gè)突變點(diǎn)對KatG蛋白結(jié)構(gòu)和功能的影響以及它們與INH耐藥的相關(guān)性,從而為明確耐藥結(jié)核桿菌基因譜打下基礎(chǔ).在最后一部分研究中,作者以Haloarcula marismortui來源的過氧
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