海島棉D(zhuǎn)ELLA基因克隆及其功能分析.pdf

1、目的：棉花是一種全球性的重要經(jīng)濟(jì)作物，也是我國重要的經(jīng)濟(jì)和戰(zhàn)略物資。海島棉（長絨棉）（Gossiypium barbadense）在棉花栽培種中品質(zhì)最優(yōu)。而棉纖維品質(zhì)的改良是棉花育種工作的重點(diǎn)。赤霉素在棉花纖維發(fā)育過程中起著重要作用。DELLA蛋白是赤霉素信號傳導(dǎo)通路中的一類重要負(fù)調(diào)節(jié)因子。通過克隆海島棉中DELLA蛋白及對其功能進(jìn)行研究，對闡明海島棉GA信號通路以及以后利用分子生物學(xué)方法改良海島棉纖維品質(zhì)都將有一定的意義。
　　

2、 方法：用同源克隆法，以海島棉基因組DNA為模板,通過PCR技術(shù)獲得了DELLA基因的同源片段：GbGAI2和GbGAI3。分別將GbGAI2和GbGAI3完整編碼區(qū)和缺失DELLA區(qū)的N端短截片段置于植物表達(dá)載體的35S啟動子的下，構(gòu)建成植物表達(dá)載體p35S:GAI2，p35S:gai2,,p35S:GAI3，p35S:gai3，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥。
　　 結(jié)果與結(jié)論：通過同源克隆的方法成功地克隆了兩個海島棉的

3、DELLA基因，GbGAI2與 GbGAI3，其中GbGAI2的完整ORF長1,848 bp，編碼616個氨基酸，GbGAI3的完整ORF長1,626 bp，編碼542個氨基酸。通過與已知的DELLA蛋白序列比對發(fā)現(xiàn)，GbGAI2與 GbGAI3具有典型地DELLA蛋白的結(jié)構(gòu)域。過量表達(dá)GbGAI2、GbGAI3和Gbgai3均導(dǎo)致擬南芥轉(zhuǎn)基因植株生長受阻和延遲開花，GbGAI3比GbGAI2的作用明顯，而Gbgai3 嚴(yán)重抑制植株生長