海島棉一個表面受體蛋白基因Gbvdr3的克隆及其啟動子的特征分析.pdf

1、黃萎病是一種危害嚴重的土傳維管束病害，其致病菌寄主范圍廣泛、致病力分化明顯，所以至今也沒有找到有效的防治辦法。抗黃萎病資源缺乏、黃萎病抗性遺傳基礎(chǔ)狹窄、抗黃萎病育種周期長及育種方法單一等，是抗黃萎病育種存在的主要問題。隨著現(xiàn)代分子生物學技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因育種為選育新的抗病品種開拓了無限廣闊的前景。因此，抗黃萎病基因的克隆成為當前抗病研究的熱點。
　　 本研究從海島棉中克隆了一個具有受體類似蛋白基因結(jié)構(gòu)域的棉花抗性相關(guān)基因Gbvd

2、r3。該基因全長為3412bp，編碼1068個氨基酸。編碼的蛋白與番茄Ve1和Ve2基因的相似性為49％。將該基因構(gòu)建到由組成型啟動子CaMV35S控制的植物過量表達載體pCAMBIA2301上，并將其轉(zhuǎn)入擬南芥哥倫比亞型植株中。經(jīng)抗生素篩選與分子檢測，得到轉(zhuǎn)基因擬南芥5個植株。對轉(zhuǎn)基因擬南芥進行功能驗證表現(xiàn)出了不同程度的抗病性。與野生型對照相比，轉(zhuǎn)基因植株盡管也出現(xiàn)了一定的病癥，但是植株仍然可以正常結(jié)實?？共⌒澡b定結(jié)果顯示該基因過量表

3、達可以顯著提高擬南芥對落葉型菌系V991的抗性，而對非落葉型菌系BP2的抗性并無顯著增強。
　　 為了進一步研究Gbvdr3基因在抗病過程中的作用，本研究還通過染色體步移法(Genomewalking)獲得了其啟動子序列，并用PLACE軟件對其進行序列分析。序列分析結(jié)果顯示該啟動子含有許多與抗病、脅迫和光調(diào)控相關(guān)的元件。本研究還構(gòu)建了Gbvdr3基因啟動子與GUS基因融合的重組載體并利用Gbvdr3基因啟動子驅(qū)動GUS基因的表達