大鼠精子發(fā)生相關(guān)基因的克隆及其結(jié)構(gòu)與功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、在該課題組以前的工作中,采用曲細(xì)精管分段分離的方法,結(jié)合差異顯示PCR(DDRT-PCR)技術(shù),獲得新的、具有表達(dá)差異的ESTs(ExpressionSequenceTags).該文在此工作的基礎(chǔ)上,選擇其中6個(gè)新的ESTs作為混合探針,結(jié)合放射性同位素標(biāo)記法標(biāo)記探針,篩選大鼠睪丸λZAPcDNA文庫(kù),得到2個(gè)新的全長(zhǎng)cDNA序列.第一個(gè)cDNA全長(zhǎng)為1185bp,命名為RSD-6.第二個(gè)cDNA全長(zhǎng)為1138bp,命名為RSD-7.研

2、究人員成功地構(gòu)建了全長(zhǎng)RSD-7基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX4T3-RSD-7,并在大腸桿菌中進(jìn)行了大量表達(dá).利用切膠純化的方法純化RSD-7融合蛋白,以此為抗原,免疫新西蘭大白兔,制備了高效價(jià)的抗RSD-7蛋白多克隆抗體.用自行制備的抗RSD-7抗體進(jìn)行RSD-7蛋白在睪丸組織的免疫組織化學(xué)定位研究.結(jié)果顯示RSD-7蛋白定位于Sertoli細(xì)胞胞漿和質(zhì)膜上.根據(jù)RSD-7基因3'、5'序列分別與人的基因組和人ESTs有高度同源性的特點(diǎn)

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