基于修飾介孔硅材料負載的免標記電化學多組分免疫檢測.pdf

1、本論文通過引入納米金膠粒子、離子液體、介孔二氧化硅等納米材料，采用新型的免標記方法制備多組分電化學免疫傳感器，用于兩種腫瘤標志物的同時免疫檢測。主要研究工作如下:
　　1.本文制備了具有不同孔徑的功能介孔二氧化硅材料MPS及多種修飾介孔材料。在合成過程中，通過改變擴孔劑TMB的用量，制備具有不同孔徑的介孔二氧化硅材料MPS，繼而對介孔MPS內(nèi)外壁進行修飾制備功能介孔材料。采用硼氫化鈉還原法將金納米粒子固定在介孔材料孔道內(nèi)制備了修飾

2、介孔硅材料GNPs/MPS。此外，本文合成了巰基乙酸修飾的硫化鎘量子點CdSQDs及硒化鎘量子點CdSeQDs，并制備得到以上兩種量子點分別修飾的介孔材料。采用本文制備的介孔材料的孔道來構筑免標記型通道生物傳感器將會拓寬介孔材料的應用范圍，并且大大降低傳統(tǒng)離子通道傳感器中納米孔道的制備難度和成本，提高通道傳感器制備的重現(xiàn)性。
　　2.本文建立了一種可同時檢測雙組份腫瘤標志物的免標記電化學免疫測定方法，檢測了人血清樣品中癌胚抗原(C

3、EA)和甲胎蛋白(AFP)的含量。在實驗中，我們首先將二種電化學底物，亞甲基藍(MB)和巰基二茂鐵(FeC)，分別結合在金納米粒子(GNPs)修飾的介孔硅(MPS)的孔道內(nèi)，制備MB-GNPs-MPS和FeC-GNPs-MPS復合材料;然后將CEA單克隆抗體(anti-CEA)和AFP單克隆抗體(anti-AFP)分別負載到兩種材料的孔內(nèi)，制得CEA和AFP的免標記免疫探針(anti-CEA/MB-GNPs-MPS，anti-AFP/F

4、eC-GNPs-MPS);最后將免疫探針涂覆在摻銦氧化錫(ITO)電極表面的不同部分，組裝得到雙組分的免標記免疫傳感器。當該免疫傳感器在含有抗原的樣液中溫育后，CEA和AFP抗愿通過特異性免疫反應而結合到MPS孔道內(nèi)。由于形成的免疫復合物不導電且有一定的空間位阻，所以對電極表面的電子轉移產(chǎn)生了阻礙。根據(jù)ITO不同位置上響應電流的變化實現(xiàn)對CEA和AFP含量的同時測定。一個GNPs通過金-硫鍵作用連接上百個電化學發(fā)光底物，能實現(xiàn)所構建體系

5、信號的放大，使制備的免疫傳感器具有良好的靈敏度。本方法對CEA和AFP的檢測線性范圍分別為0.05-50ngml-1和0.1-100ngml-1，檢測限分別為0.1ngml-1和0.1ngml-1(S/N=3)。
　　3.本文建立了一種可同時檢測雙組份腫瘤標志物的免標記電化學免疫測定方法，檢測了人血清樣品中癌胚抗原(CEA)和甲胎蛋白(AFP)的含量。在實驗中，我們首先將二種電化學底物，二茂鐵甲酸(FCA)和亞甲基藍(MB)，分別

6、結合在離子液體(IL)修飾的介孔硅(MPS)的孔道內(nèi)，制備FCA-IL-MPS和MB-IL-MPS復合材料;然后將CEA單克隆抗體(anti-CEA)和AFP單克隆抗體(anti-AFP)分別負載到兩種材料的孔內(nèi)，制得CEA和AFP的免標記免疫探針(anti-CEA/FCA-IL-MPS，anti-AFP/MB-IL-MPS);最后將免疫探針涂覆在摻銦氧化錫(ITO)電極表面的不同部分，組裝得到雙組分的免標記免疫傳感器。當該免疫傳感器在

7、含有抗原的樣液中溫育后，CEA和AFP抗原通過特異性免疫反應而結合到MPS孔道內(nèi)。由于形成的免疫復合物不導電且有一定的空間位阻，所以對電極表面的電子轉移產(chǎn)生了阻礙。根據(jù)ITO不同位置上響應電流的變化實現(xiàn)對CEA和AFP含量的同時測定。本方法對CEA和AFP的檢測線性范圍分別為0.5-80ngml-1和0.5-100ngml-1，檢測限分別為0.1ngml-1和0.1ngml-1(S/N=3)。離子液體具有高導電率，能實現(xiàn)所構建體系信號的