ADMA在單核-巨噬細(xì)胞分化為泡沫細(xì)胞過(guò)程中對(duì)膽固醇酯及ACAT-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察ADMA對(duì)單核/巨噬細(xì)胞分化為泡沫細(xì)胞過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯含量及ACAT-1表達(dá)的影響，初步探討ADMA在單核/巨噬細(xì)胞分化為泡沫細(xì)胞過(guò)程中的作用及其機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．培養(yǎng)人THP-1單核細(xì)胞株，給予160nmol/L 佛波酯（phorbol myristate acetate，PMA）孵育48h，然后再與80mg/L 氧化型低密度脂蛋白（oxidized-low-densit y

2、 lipoprotein，ox-LDL）孵育24h，用油紅O 染色在光鏡下觀察。
　　 2．以不同濃度ADMA （1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L）作用泡沫細(xì)胞24h，酶比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的含量；以20μmol/LADMA作用泡沫細(xì)胞不同時(shí)間（0h、6h、12h、24h、48h），酶比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的含量。
　　 3．將THP-1單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及泡沫細(xì)

3、胞分別用20μmol/L ADMA 干預(yù)24h，Wes t e r n bl o t和RT-PCR分別檢測(cè)單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞及泡沫細(xì)胞內(nèi)?；o酶A 膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶-1(ACAT-1)的蛋白和mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.單核細(xì)胞株THP-1經(jīng)PMA 誘導(dǎo)后，可分化為巨噬細(xì)胞，再經(jīng)ox-LDL 誘導(dǎo)后，可轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。
　　 2.與對(duì)照組相比，5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μ

4、mol/L的ADMA作用于THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞24h后，細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯含量均明顯增加（P<0.01）。
　　 3.與對(duì)照組相比，20μmol/L的ADMA作用于THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞12h、24h及48h后，細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯含量均明顯增加（P<0.01）。
　　 4.與THP-1單核細(xì)胞相比，巨噬細(xì)胞（P<0.05）、泡沫細(xì)胞（P<0.01）中ACAT-1蛋白及mRNA表達(dá)增加；與巨噬細(xì)胞相比，泡沫細(xì)胞中

5、ACAT-1蛋白及mRNA水平增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 5.與各自對(duì)照組相比，經(jīng)ADMA作用后三種細(xì)胞ACAT-1蛋白及mRNA水平表達(dá)均增加（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.ADMA 可顯著增加泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的含量，并呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　 2.單核/巨噬細(xì)胞分化為泡沫細(xì)胞過(guò)程中ACAT-1表達(dá)增加，ADMA 可進(jìn)一步上調(diào)ACAT-1的蛋白及mRNA表達(dá)。