ADMA對(duì)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞的影響及其對(duì)MCP-1及LOX-1表達(dá)的作用.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是動(dòng)脈的一種慢性炎癥性病變，其發(fā)生過(guò)程中單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是個(gè)非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。不對(duì)稱(chēng)二甲基精氨酸(ADMA)作為內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制劑(NOS)可誘導(dǎo)NO解偶聯(lián)并增加氧自由基的產(chǎn)生，參與促進(jìn)AS發(fā)生發(fā)展的炎癥反應(yīng)過(guò)程，然而，ADMA在單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞過(guò)程中的作用尚不明確。本課題通過(guò)觀察ADMA對(duì)單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞過(guò)程中分泌重要炎癥因子單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及植物凝集素樣氧化低密度脂

2、蛋白受體-1(LOX-1)的影響，探討ADMA在單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞過(guò)程中的作用。
　　 方法：(1)ADMA對(duì)單核細(xì)胞分泌MCP-1的影響：培養(yǎng)人單核細(xì)胞，分別用ADMA(20mmol/L)、ADMA(20umol/L)及L-精氨酸(1.2mmol/L)孵育單核細(xì)胞48h，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定上清液中MCP-1含量，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定MCP-1mRNA的表達(dá)；(2)ADMA對(duì)單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞過(guò)程中LOX-1表達(dá)的影

3、響：培養(yǎng)人單核細(xì)胞，并用佛波酯誘導(dǎo)其分化為巨噬細(xì)胞，在此過(guò)程中分別用ADMA(20umol/L)、ADMA(20umol/L)及L-精氨酸(1.2mmol/L)、L-精氨酸(1.2mmol/L)孵育單核細(xì)胞48h，Westernblotting法測(cè)定細(xì)胞中LOX-1的蛋白表達(dá)量，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定LOX-1mRNA的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組間比較用單因素方差分析及析因分析，采用

4、q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05確定差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與空白對(duì)照組相比，20umol/LADMA作用于人單核細(xì)胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯提高(P＜0.01)。
　　 (2)與空白對(duì)照組相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于人單核細(xì)胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 (3)與20

5、mmol/LADMA相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于人單核細(xì)胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01)。
　　 (4)與空白對(duì)照組相比，20umol/LADMA作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA表達(dá)升高(P＜0.05)，蛋白表達(dá)水平明顯升高(P＜0.01)。
　　 (5)與空白對(duì)照組相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨

6、酸作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平有提高(P＜0.05)。而單用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 (6)與20umol/LADMA組相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA表達(dá)水平降低(P＜0.05)，

7、蛋白表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01)，單用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA降低(P＜0.05)，蛋白表達(dá)水平與20umol/LADMA組相比明顯降低(P＜0.01)。
　　 (7)與20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸相比，單用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人單核細(xì)胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(P＜0.05)。