MCP-1、HO-1在冠心病患者單核細(xì)胞中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　單核細(xì)胞趨化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）是單核細(xì)胞特異性趨化因子，與動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）形成關(guān)系密切。既往大量研究從體外細(xì)胞水平、動(dòng)物模型上證實(shí)了誘導(dǎo)MCP-1表達(dá)可加快AS形成，抑制MCP-1表達(dá)可阻止AS形成。血紅素氧化酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）是一種可誘導(dǎo)的內(nèi)源性抗炎、抗氧化酶，在氧化應(yīng)激、炎

2、癥環(huán)境中明顯高表達(dá)，被認(rèn)為是一種AS形成中內(nèi)源性血管保護(hù)因子。在體外細(xì)胞、動(dòng)物模型中也證實(shí)其對(duì)AS形成的抑制作用。在體外單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及基因剔除動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)HO-1低表達(dá)或表達(dá)缺失可導(dǎo)致MCP-1高表達(dá)，加快AS形成。
　　但迄今為止，對(duì)在臨床CHD患者中MCP-1與HO-1兩者的相關(guān)關(guān)系尚未闡明，特別是在單核細(xì)胞中的關(guān)系；而既往臨床調(diào)查研究多從血漿蛋白水平探討MCP-1、HO-1與CHD的關(guān)系，對(duì)臨床CHD患者

3、MCP-1、HO-1在單核細(xì)胞基因水平上的表達(dá)尚需進(jìn)一步闡明。
　　因此，本研究擬從臨床現(xiàn)象入手，以臨床冠脈造影患者為研究對(duì)象，提取外周血單核細(xì)胞，觀察MCP-1和HO-1 mRNA表達(dá)量在CHD患者和對(duì)照個(gè)體間的差異與兩者間表達(dá)的相關(guān)性，以及兩者分別與臨床CHD患者冠脈血管病變嚴(yán)重程度相關(guān)性，評(píng)估MCP-1與HO-1 mRNA水平對(duì)CHD的預(yù)測(cè)能力；再進(jìn)一步在體外單核細(xì)胞中研究HO-1過(guò)表達(dá)或低表達(dá)對(duì)MCP-1表達(dá)量的影響，以闡

4、明單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1、HO-1 mRNA水平與CHD發(fā)病及冠脈血管病變嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)，為HO-1/MCP-1臨床轉(zhuǎn)化可行性提供有力的科學(xué)依據(jù)。
　　目的：
　　1.MCP-1、HO-1在CHD患者單核細(xì)胞中的表達(dá)、與冠脈血管病變的嚴(yán)重程度（以血管病變支數(shù)及 Gensini評(píng)分系統(tǒng)評(píng)判）的相關(guān)性；
　　2.在CHD患者單核細(xì)胞中觀察MCP-1與HO-1之間的相關(guān)性；
　　3.評(píng)價(jià)MCP-1、HO-1在CHD中的診

5、斷價(jià)值；
　　4.體外培養(yǎng)人THP-1單核細(xì)胞，使HO-1過(guò)表達(dá)/低表達(dá)，證實(shí)其對(duì)MCP-1的影響。
　　方法：
　　1.經(jīng)排除近期患急慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤性疾病、慢性纖維增生性疾病、播散性血管內(nèi)凝血和嚴(yán)重肝腎功能不全個(gè)體后，入選2013年05月—2014年01月期間在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科住院并行冠脈造影（Coronary angiography，CAG）檢查的242例患者，經(jīng)CAG確診

6、的正常對(duì)照個(gè)體79例（作為對(duì)照組），CHD患者163例（作為CHD組），其中CAG發(fā)現(xiàn)單支血管病變的患者79例（作為單支血管病變組）、多支血管病變的患者84例（作為多支血管病變組）。采用Gensini評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估血管狹窄的嚴(yán)重程度。
　　2.入選個(gè)體冠脈造影前抽取10mL外周血，利用密度梯度離心法和塑料吸附法提取單核細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR測(cè)定MCP-1、HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　3.不同濃度（0.0、25.

7、0、50.0、100.0、200.0 mg/L）ox-LDL，作用不同時(shí)間（0、12、18、24、48 h），刺激THP-1單核細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)MCP-1mRNA表達(dá)；分別用10μmol/L ZnPP和CoPP干預(yù)THP-1單核細(xì)胞12 h后，再用ox-LDL（100 mg/L）刺激24 h，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分別檢測(cè)MCP-1和HO-1 mRNA表達(dá)。
　　4.采用SPSS17.0分析軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量數(shù)

8、據(jù)釆用X土SD表示,兩組間比較用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),多組間比較用One-Way ANOVA（方差齊時(shí)多重比較用LSD法；方差不齊時(shí),用Welch法，組間多重比較用Tamhane's T2法）,計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，邏輯回歸分析計(jì)算OR值和95％可信區(qū)間，判斷兩個(gè)連續(xù)變量的相關(guān)性用Pearson相關(guān)性分析,作ROC曲線計(jì)算曲線下面積，判斷敏感性及特異性；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組比，MCP-1

9、mRNA相對(duì)表達(dá)量在CHD組高表達(dá)（P<0.01），且CHD亞組中多支血管病變組較單支血管病變組高（P<0.01）；邏輯回歸分析結(jié)果MCP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量OR值3.21（95%可信區(qū)間1.66-6.19，P<0.001）。
　　2.與對(duì)照組比，HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量在CHD組高表達(dá)（P<0.01），但在CHD亞組中單支血管病變組與多支血管病變組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；邏輯回歸分析結(jié)果HO-1 mRNA相對(duì)

10、表達(dá)量OR值1.21（95%可信區(qū)間1.09-1.33，P<0.001）。
　　3.MCP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與Gensini積分呈中度正相關(guān)（r=0.430，P<0.001）；HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與Gensini積分呈弱正相關(guān)（r=0.230，P<0.001）。
　　4.MCP-1 ROC曲線下面積0.720±0.032，P<0.0001，靈敏性58.9%，特異性71.0%；HO-1 ROC曲線下面積0.652

11、±0.036，P<0.0001，靈敏性67.5%，特異性55.7%；聯(lián)合兩者指標(biāo)，ROC曲線下面積0.668±0.035，P<0.0001，靈敏性58.9%，特異性69.6%。
　　5.MCP-1與HO-1 mRNA在CHD患者單核細(xì)胞中呈正相關(guān)，r=0.433，P<0.01。
　　6.ox-LDL呈濃度和時(shí)間依賴性上調(diào)THP-1單核細(xì)胞MCP-1 mRNA表達(dá)（P<0.01）；CoPP（HO-1激動(dòng)劑）組HO-1 mRNA