CAV-1對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）的表達(dá)增加是內(nèi)皮功能紊亂的重要表現(xiàn)之一，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）可以通過血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體（LOX-1）介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1的表達(dá)增加，若預(yù)先加入反義LOX-1 mRNA則可抑制上述過程，表明LOX-1在介導(dǎo)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞中MCP-1表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮重要作用。然而LOX-1的結(jié)構(gòu)分析顯示LOX-1胞內(nèi)段無SH2域，且不與G蛋白偶聯(lián)，卻可激活酪氨酸蛋白激酶途徑及G蛋

2、白介導(dǎo)的PKC信號(hào)途徑。因此，LOX-1如何介導(dǎo)信號(hào)跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制尚不清楚。由于多種信號(hào)分子聚集在Caveolae區(qū)，CAV-1是其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心,可介導(dǎo)多種受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，且本課題組通過激光共聚焦檢測(cè)到LOX-1與CAV-1在中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）上共定位，由此我們推測(cè)，CAV-1可能協(xié)助LOX-1介導(dǎo)ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1的表達(dá)增加。 本實(shí)驗(yàn)采用激光共聚焦技術(shù)，檢測(cè)到培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中LOX-1與CAV-

3、1共定位。采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)cav-1 mRNA及蛋白水平，以此篩選出一對(duì)有效的特異性cav-1 siRNA。在上述基礎(chǔ)上，將培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為以下三組：空白對(duì)照組（正常培養(yǎng)基），ox-LDL刺激組（未轉(zhuǎn)染特異性cav-1 siRNA）及cav-1 siRNA組（轉(zhuǎn)染體外化學(xué)合成的特異性cav-1 siRNA24 h后ox-LDL刺激24 h），采用RT-PCR和ELISA方法檢測(cè)MCP-1 mRNA

4、及蛋白水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與空白對(duì)照組相比，ox-LDL刺激組MCP-1的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著增加（P<0.05）；而cav-1 siRNA組可顯著降低ox-LDL誘導(dǎo)的MCP-1的表達(dá)量（P<0.05）。 我們的結(jié)果表明有效抑制CAV-1的表達(dá)可以下調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1的表達(dá)，提示CAV-1在ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮功能紊亂的信號(hào)傳遞途徑中可能發(fā)揮重要作用。我們將進(jìn)一步采用突變體構(gòu)建、FRET等技術(shù)證實(shí)CAV