酶法制磷脂酰絲氨酸.pdf

1、磷脂酰絲氨酸(PS)是一種具有良好腦神經(jīng)系統(tǒng)促進(jìn)作用的磷脂。天然存在的PS量很低，且不容易提取，成本極高，因此人工合成價(jià)廉高效的PS成為當(dāng)今科研研究的重要議題。
　　 1.PS的合成研究中，由于PS具有低UV吸收、不穩(wěn)定以及溫感強(qiáng)的特性，給檢測(cè)帶來(lái)了很大的難度且效果一直不好，本文首次嘗試用HPLC/ELSD測(cè)定絲氨酸的降解率來(lái)衡量產(chǎn)物的生成量，建立了一種檢測(cè)產(chǎn)物PS的新方法，該方法簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定可靠，并從側(cè)面反應(yīng)了磷脂酶D的轉(zhuǎn)酯

2、活性。
　　 2.利用一系列統(tǒng)計(jì)學(xué)方法優(yōu)化兩相反應(yīng)體系的主要反應(yīng)條件，在單因素優(yōu)化的基礎(chǔ)上通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定對(duì)反應(yīng)體系影響顯著的因素;然后利用中心組成設(shè)計(jì)(CCD)和響應(yīng)面法(RSM)獲得生產(chǎn)PS的最優(yōu)反應(yīng)體系，轉(zhuǎn)化率可達(dá)到55％。
　　 3.本文研究了PS的純化體系，確定了合成PS的酶系純化方法，經(jīng)過(guò)一系列純化過(guò)程后得到的PS的比活力比粗酶液提高了21.7倍，酶活力回收率10.56％。蛋白電泳顯示清晰單一條帶，基本達(dá)到了

3、電泳純，分子量為40KDa，為工業(yè)化酶法生產(chǎn)絲氨酸磷脂奠定了基礎(chǔ);
　　 4.PLD酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)的PLD的催化水解反應(yīng)的最適pH值為6，pH5-7之間比較穩(wěn)定;最適水解溫度為40℃，溫度低于60℃活性較穩(wěn)定;轉(zhuǎn)酯反應(yīng)的最適pH值為5.8，在pH4-7之間比較穩(wěn)定;最適轉(zhuǎn)酯溫度為32℃，溫度低于50℃活性較穩(wěn)定;該磷脂酶D在4℃下保存穩(wěn)定性較好，半衰期長(zhǎng)達(dá)98天。與文獻(xiàn)相比，實(shí)驗(yàn)室這株菌更耐高溫和耐酸。<