小球藻和鹽藻耐石油污染藻株的篩選及其利用石油烴富集油脂的研究.pdf

1、伴隨著能源危機(jī)和化石燃料對(duì)生態(tài)環(huán)境的破壞，可再生環(huán)保能源的研發(fā)備受關(guān)注。無(wú)污染的生物質(zhì)能—生物柴油—成為了最具開(kāi)發(fā)與應(yīng)用前景的可再生能源。與傳統(tǒng)油料作物相比，只需要水和陽(yáng)光就能生長(zhǎng)的藻類(lèi)更具優(yōu)勢(shì)。以藻類(lèi)為原料生產(chǎn)生物柴油和微藻燃料已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)研發(fā)的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)選用海水小球藻（Chlorella sp.）和鹽生杜氏藻（Dunaliella salina），兩種常見(jiàn)的含油脂高的海洋微藻作為研究對(duì)象，利用單細(xì)胞分離和血球計(jì)數(shù)法篩選出誘變出

2、發(fā)株，利用紫外誘變技術(shù)誘變出發(fā)株并在添加低濃度石油的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，利用血球計(jì)數(shù)法測(cè)定生長(zhǎng)曲線，利用雙縮脲法、硫酸蒽酮法和分光光度計(jì)法對(duì)其生化成分進(jìn)行分析，分別獲得兩種微藻耐石油污染的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)藻株，再將其分別接種于不同石油濃度的海水培養(yǎng)液中，利用紫外分光光度法和熒光分光光度法分別測(cè)定培養(yǎng)液中帶共軛雙鍵的烴類(lèi)化合物和芳烴含量，利用索氏提取法測(cè)定微藻細(xì)胞內(nèi)油脂含量，采用氣相色譜和質(zhì)譜法分析了苯和甲苯對(duì)兩種微藻細(xì)胞富集油脂的影響。具體結(jié)果如

3、下:
　　1、小球藻和鹽藻耐石油污染藻株的篩選
　　(1)通過(guò)單細(xì)胞分離培養(yǎng)和觀察，分別獲得小球藻和鹽藻各5株生長(zhǎng)旺盛的供選藻株，經(jīng)生長(zhǎng)量和生長(zhǎng)速率分析后確定小球藻M4藻株和鹽藻M02藻株作為紫外誘變的出發(fā)株。
　　(2)經(jīng)過(guò)預(yù)誘變考察誘變條件，確定小球藻和鹽藻紫外誘變的最佳條件為:30W紫外燈，照射垂直距離15cm，照射時(shí)間20min。
　　(3)經(jīng)過(guò)紫外誘變和耐石油藻株的篩選，通過(guò)生長(zhǎng)曲線和胞內(nèi)外蛋白、胞內(nèi)外

4、多糖及色素含量的分析，分別獲得耐石油污染的紫外誘變優(yōu)勢(shì)株小球藻A16和鹽藻A001。
　　2、小球藻和鹽藻利用石油烴富集油脂
　　(1)紫外分光光度法和熒光分光光度法分析表明，石油濃度為1.5-10.0μg/mL的培養(yǎng)液中，小球藻和鹽藻均能有效降解帶共軛雙鍵的烴類(lèi)化合物，降解率分別為25.3-35.5％和17.9-24.0％，芳烴降解率分別為22.1-30.2％和18.7-26.2％。石油濃度為3.5μg/mL時(shí)，小球藻和鹽

5、藻對(duì)帶共軛雙鍵的烴類(lèi)化合物和芳烴的降解效率均達(dá)最大值，而且小球藻的降解能力略好于鹽藻。
　　(2)索氏提取法結(jié)果表明，石油濃度為1.5μg/mL和3.5μg/mL時(shí)，培養(yǎng)第15天小球藻和鹽藻的細(xì)胞內(nèi)油脂含量均明顯增加，其中石油濃度為3.5μg/mL時(shí)，兩種微藻的胞內(nèi)油脂含量均達(dá)最大值，分別占細(xì)胞干重的14.0％和25.5％，分別是對(duì)照組的1.5倍和1.2倍。
　　3、苯和甲苯促進(jìn)小球藻和鹽藻細(xì)胞富集油脂
　　(1)氣相