萊茵衣藻高產(chǎn)油脂藻株的誘變篩選及其油脂代謝關(guān)鍵酶基因的轉(zhuǎn)錄分析.pdf

1、面對(duì)日益枯竭的化石能源和嚴(yán)重惡化的生態(tài)環(huán)境，生物柴油作為一種新型可再生的清潔能源，引起世界各國的關(guān)注。微藻能進(jìn)行光合作用，生長(zhǎng)速度快、油脂含量高、且培養(yǎng)占用耕地，被認(rèn)為是最具潛力的油脂生物能源。但是生產(chǎn)成本較高，微藻能源至今未突破產(chǎn)業(yè)化這個(gè)瓶頸。本研究旨在通過誘變選育的方法獲得生長(zhǎng)速度快且油脂含量高的微藻，并對(duì)其油脂代謝關(guān)鍵酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析，探究其油脂含量增加的可能原因和途徑，以期為微藻生物柴油高產(chǎn)油脂藻種的選育及在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用基因

2、工程手段進(jìn)行藻株的改造提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)首先確定了紫外線照射時(shí)間（20s，25s）與喹禾靈篩選濃度（5.5，6.0μmol/L），采用紫外線誘變與喹禾靈脅迫相結(jié)合的方法對(duì)萊茵衣藻CC-124進(jìn)行定向選育。通過測(cè)定生長(zhǎng)速率初篩出5株生長(zhǎng)速度較快的突變?cè)逯辏媚崃_紅染色對(duì)限氮培養(yǎng)第4天的藻細(xì)胞油脂進(jìn)行觀察，挑選出了2株油脂顆粒大且數(shù)目多的突變?cè)逯辏?-2-2和9-2-7。采用酸解法測(cè)定了出發(fā)株和突變株限氮培養(yǎng)第0、4、6天時(shí)中

3、性脂的含量，2個(gè)突變?cè)逯甓急憩F(xiàn)出高于出發(fā)藻株的中性脂水平。
　　利用GeNorm、BestKeeper和NormFinder三個(gè)內(nèi)參基因篩選軟件從18SrRNA、COX4、COX12、actin這四個(gè)候選內(nèi)參基因中選出表達(dá)最穩(wěn)定的COX12作為最適內(nèi)參基因，對(duì)出發(fā)藻株、突變?cè)逯?-2-2和9-2-7在限氮培養(yǎng)0、2、4、6天時(shí)4個(gè)微藻油脂代謝關(guān)鍵酶基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。這4個(gè)酶分別為乙酰輔酶A羧化酶（ACCa