基于NGF緩釋作用的梯度神經(jīng)導(dǎo)管的制備及其性能研究.pdf

1、本論文通過層層靜電自組裝及偶合交聯(lián)技術(shù)將神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)復(fù)合到載體材料上，制備一種應(yīng)用于神經(jīng)損傷修復(fù)的緩釋NGF神經(jīng)導(dǎo)管。論文采用聚乳酸(PDLLA)作為基質(zhì)，添加β-磷酸三鈣(β-TCP)制備多孔隙梯度芯材，在芯材表面引入正電荷；利用層層靜電自組裝技術(shù)，通過透明質(zhì)酸(HA)和殼聚糖(CHS)的陰陽離子靜電吸附作用構(gòu)建自組裝多層膜，并將藥物NGF通過EDC交聯(lián)偶合到自組裝層上；得到多孔隙的

2、聚乳酸/β-磷酸三鈣/透明質(zhì)酸/殼聚糖/神經(jīng)生長因子(PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF)梯度神經(jīng)導(dǎo)管，并對其進(jìn)行表征及性能評價。
　　通過探討自組裝層數(shù)、時間、溫度、pH值和組裝溶液濃度比等因素對PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF緩釋神經(jīng)導(dǎo)管制備的影響以確定最佳制備工藝。結(jié)果表明：最佳制備條件為每層組裝30min，溫度為30℃，組裝溶液的pH值為3.8，HA/CHS的濃度比為3:1。
　　利用傅立葉變換

3、紅外光譜儀(ATR-FTIR)、X射線衍射(XRD)、掃描電子顯微鏡(SEM)、微機(jī)控制電子萬能試驗(yàn)機(jī)、接觸角測定儀對材料的結(jié)構(gòu)、機(jī)械性能及親水性能進(jìn)行表征和測試。結(jié)果表明：這種多孔隙NGF緩釋梯度神經(jīng)導(dǎo)管的設(shè)計滿足組織工程材料的要求，有望更好地促進(jìn)周圍神經(jīng)修復(fù)與再生。
　　對各組神經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行體外降解實(shí)驗(yàn)，測定降解過程中降解介質(zhì)pH值的變化，失重率的變化，并觀察降解后導(dǎo)管材料的掃描電鏡顯微結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：β-磷酸三鈣的加入能夠起到

4、調(diào)節(jié)降解介質(zhì)pH值，使得介質(zhì)的pH值維持在中性；并且加速神經(jīng)導(dǎo)管的降解，在第12周時，其失重率約為48.3％；且從掃描電鏡圖可以看出β-磷酸三鈣隨著降解時間的增加會逐漸浮現(xiàn)出來，最終造成整個神經(jīng)導(dǎo)管的崩解。
　　采用酶聯(lián)免疫吸附法測定NGF的含量并對神經(jīng)生長因子的釋放性能進(jìn)行考察。結(jié)果表明：隨著自組裝層和芯材的逐步降解，NGF被緩慢釋放出來，其釋放周期約為30天，累計釋放率可以達(dá)到90％，具有較好的緩釋作用；NGF浸提液對PC12

5、細(xì)胞的軸突生長與伸長有一定的促進(jìn)作用，說明神經(jīng)導(dǎo)管中交聯(lián)的NGF保留活性。
　　將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSC)、腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)和雪旺細(xì)胞(RSC96)分別與PDLLA、PDLLA/β-TCP、PDLLA/HA/CHS及PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF神經(jīng)導(dǎo)管共培養(yǎng)，通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)法考察不同組成成分的神經(jīng)導(dǎo)管的生物相容性，細(xì)胞免疫熒光染色來觀察材料表面粘附細(xì)胞數(shù)目