富集細胞提取物中微量蛋白質(zhì)及識別腫瘤細胞表面特征蛋白質(zhì)的分子印跡納米粒子的研究.pdf

1、近年來，具有良好穩(wěn)定性和高度特異識別性的分子印跡聚合物愈加受到了人們的青睞。然而，對于具有重要生理意義的蛋白質(zhì)而言，分子印跡聚合物的應(yīng)用與發(fā)展并不盡如人意。本博士論文在本課題組先前的蛋白質(zhì)印跡工作的基礎(chǔ)上，對蛋白質(zhì)印跡聚合物進行了大量而細致的研究。論文分為兩部分:第一部分是以納米硅球為載體制備的蛋白質(zhì)印跡聚合物納米粒子從細胞提取物中分離富集免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(BiP)的研究;第二部分是對識別腫瘤細胞表面特征跨膜蛋白人類表皮生長因子受

2、體2(ErbB2)的分子印跡納米粒子的研究。
　　在第一部分工作中，為了使蛋白質(zhì)印跡聚合物具有更高的特異性和吸附量，我們選擇了表面雙鍵化的二氧化硅納米球作為載體和帶有隨機分布羧基和吡啶識別基團的輔助識別聚合物鏈(ARPCs)作為輔助單體，以克隆蛋白質(zhì)BiP為模板，通過表面聚合印跡法合成了核-殼型的分子印跡聚合物納米粒子，將其用于細胞提取物中的天然微量蛋白質(zhì)的識別和富集。納米載體和輔助單體的同時使用，不僅可增強印跡聚合物對目標蛋白質(zhì)

3、的特異性識別能力，而且也大大提高了印跡聚合物對目標蛋白質(zhì)的吸附量。此外，由于其具有獨特的核-殼型結(jié)構(gòu)，吸附過程更容易達到動力學平衡。合成的分子印跡聚合物將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體提取物中含量僅為0.059％的BiP提高到6.25％，富集了116倍，高于先前的以大孔樹脂為載體制備的分子印跡微球的富集倍數(shù)（45倍）。并且其吸附量也遠高于以大孔樹脂為載體制備的分子印跡微球的吸附量，對分子印跡聚合物在天然低豐度蛋白質(zhì)純化方面的應(yīng)用具有重要的意義。
　　第

4、二部分工作的目標是利用分子印跡技術(shù)合成能夠特異性識別ErbB2蛋白質(zhì)的親水性熒光納米粒子，將其應(yīng)用于腫瘤細胞跨膜蛋白ErbB2的檢測，以期能夠作為ErbB2蛋白相關(guān)腫瘤的識別、跟蹤和治療的有效手段。我們采用抗原表位印跡法，選擇ErbB2蛋白位于細胞表面的一段特殊多肽作為模板，將模板多肽化學固定到固相（玻璃板或者玻璃珠）表面，然后引進ARPCs和單體，以不同引發(fā)方式合成了親水性的帶有熒光標記的殼聚糖-聚丙烯酸分子印跡納米粒子，其具有良好的