紅曲霉發(fā)酵多糖條件及抗氧化活性的初步研究.pdf

1、紅曲霉是一種“藥食同源”的典型代表真菌，紅曲培養(yǎng)物具有多種生理活性物質(zhì)，近來來發(fā)現(xiàn)，紅曲多糖是一種具有免疫調(diào)節(jié)、保肝解毒功效的活性物質(zhì)。本文對紅曲霉液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)多糖的發(fā)酵培養(yǎng)基、工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，并對紅曲霉液態(tài)發(fā)酵和雜糧固態(tài)發(fā)酵多糖的提取純化和抗氧化活性進(jìn)行了初步研究。
　　通過對實(shí)驗(yàn)室三株紅曲菌M7、Mx1和N進(jìn)行篩選，得到一株多糖含量較高的紅曲菌N;優(yōu)化后的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基為:蔗糖45g/L，酵母粉4.5g/L，KH2PO4·

2、3H2O3.5g/L，MgSO4·7H2O0.85g/L。在此條件下，紅曲霉搖瓶液態(tài)發(fā)酵的多糖質(zhì)量濃度達(dá)829.6mg/L，比優(yōu)化前的684.2mg/L提高21.3％;通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得到優(yōu)化后的發(fā)酵工藝條件為:種齡30h，接種量7.5％，發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH5.75，1000mL三角瓶裝液量162.5mL，發(fā)酵時(shí)間84h。在此條件下，紅曲霉搖瓶液態(tài)發(fā)酵的多糖質(zhì)量濃度達(dá)999.8mg/L，比優(yōu)化前的684.2mg/L提高46.1

3、％。
　　試驗(yàn)得出紅曲多糖的提取純化工藝為:先用濃氨水調(diào)節(jié)多糖溶液pH8～9，靜置，去除沉淀，加入0.2％(m/v)的木瓜蛋白酶，45℃酶解3h，80℃保溫20min滅酶活，迅速冷卻，靜置，過濾去沉淀，加入1/5的Sevag試劑（正丁醇∶氯仿=1∶4），劇烈攪拌30min，去除變性蛋白，反復(fù)操作5次，直至有機(jī)溶劑與水的中間層無沉淀。加入相對于多糖濃縮液4倍體積的工業(yè)酒精沉淀多糖，干燥，得到色素基本脫除的白色紅曲多糖。以DEAE-纖

4、維素層析對其進(jìn)行純化，依次以純水、0.2mol/LNaCl，0.4mol/LNaCl，0.6mol/LNaCl洗脫，多糖被完全洗脫，真空冷凍干燥后得到無色的紅曲多糖。
　　通過紅曲霉雜糧固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)多糖的初步研究，確定雜糧與水的質(zhì)量比為1∶2，中途補(bǔ)水對多糖產(chǎn)量均有明顯提高，紅曲霉N發(fā)酵玉米中途補(bǔ)水的多糖產(chǎn)量最高，達(dá)76.0mg/g，約為優(yōu)化后液態(tài)發(fā)酵的76倍。
　　采用分光光度法測定了紅曲多糖的總還原力，羥基自由基(·OH)