磷脂酶D生產(chǎn)菌的篩選及其基于16SrDNA的進(jìn)化研究.pdf

1、磷脂酶D(PLD:EC3.1.4.4)可催化磷脂水解為磷脂酸,同時(shí)還可催化自然界中含量豐富的磷脂酸膽堿轉(zhuǎn)酯為自然界中含量稀少甚至不存在的磷脂或磷脂衍生物。該轉(zhuǎn)酯反應(yīng)對(duì)于合成稀有天然磷脂組分及人工合成磷脂具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。到目前為止,不少生產(chǎn)PLD的菌株已經(jīng)被成功分離出來。但對(duì)于工業(yè)化生產(chǎn)來講,獲取更多性能穩(wěn)定的酶源是必要的。
　　 本文從北京昌平美亞斯磷脂廠園區(qū)土壤內(nèi)篩選出了5個(gè)生產(chǎn)PLD的放線菌(HF-0,HF-2,HF-9

2、,HF-23和HF-36)。5株菌所產(chǎn)PLD均表現(xiàn)出了不同的水解及轉(zhuǎn)酯活性。其中,HF-23所產(chǎn)PLD表現(xiàn)出了最高的水解活性(6.8U／mg)和最好的從磷脂酰膽堿轉(zhuǎn)化為磷脂酰絲氨酸的轉(zhuǎn)酯特性。此結(jié)果表明,HF-23具有良好的產(chǎn)酶性能,轉(zhuǎn)酯活性較強(qiáng),擁有制備高純度磷脂酰絲氨酸的商業(yè)應(yīng)用價(jià)值。另外,通過在反應(yīng)體系中添加Ca2+可確定,Ca2+對(duì)于同時(shí)具有水解和轉(zhuǎn)酯活性的PLD酶具有雙重影響,可降低轉(zhuǎn)酯活性而提高水解活性,對(duì)只具有水解活性不表

3、現(xiàn)轉(zhuǎn)酯活性的PLD酶則無影響。
　　 經(jīng)過對(duì)形態(tài)學(xué)、生理生化反應(yīng)特征的觀察,再結(jié)合16S rDNA序列比對(duì)確定本文所篩5個(gè)菌株同為鏈霉菌屬。以本文所分離5個(gè)菌株和前人所報(bào)道的PLD生產(chǎn)菌株的16S rDNA為基礎(chǔ)構(gòu)建進(jìn)化樹,可見進(jìn)化樹中所包含的菌株主要分成了兩個(gè)類群(HF-23位于類群Ⅰ而本文其他四個(gè)菌株位于類群Ⅱ)。與此同時(shí),大多已知的具有高催化活性的PLD的生產(chǎn)菌都屬于類群Ⅰ,表明類群Ⅰ所包含的菌株傾向于生產(chǎn)結(jié)構(gòu)較為保守,活