羥基磷灰石納米微粒的制備及其純化組氨酸融合蛋白.pdf

1、本文利用液相化學(xué)法制備了HAP/IDA-Ni2+、Fe3O4/HAP-Ni2+、Ni(OH)2/HAP及Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒，并用多種方法對合成微粒進行表征。利用 Ni2+與組氨酸標簽(His-tagged)蛋白質(zhì)之間的親和作用，將這些納米微粒作為吸附劑實現(xiàn)了對His-tagged蛋白質(zhì)的分離與純化，并對其親和分離行為進行了研究。具體研究內(nèi)容和結(jié)論如下：
　　(1) HAP/IDA納米微粒的制備及分離純化His-

2、tagged蛋白質(zhì)
　　采用水熱法在SBF溶液中成功制備了多孔的HAP納米微粒，平均粒徑在40 nm左右。利用HAP納米微粒表面的活性羥基，成功實現(xiàn)了其表面IDA功能化，進一步螯合Ni2+后，得到 HAP/IDA-Ni2+納米微粒。這種納米微粒能夠從蛋白混合液中一步純化His-tagged蛋白質(zhì)。結(jié)果表明，HAP/IDA-Ni2+納米微粒表現(xiàn)出高的特異性和吸附能力，重復(fù)利用四次后，材料依然保持較高的分離性能。HAP/IDA-Ni2

3、+納米微粒適用于分離低分子量His-tagged蛋白質(zhì)。
　　(2) Fe3O4/HAP納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)
　　采用水熱法成功制備了具有磁響應(yīng)性能的Fe3O4/HAP納米微粒。進一步螯合Ni2+后，F(xiàn)e3O4/HAP-Ni2+納米微粒在外加磁場條件下可以直接從蛋白混合液中純化His-tagged蛋白質(zhì)。結(jié)果表明，該納米微粒對His-tagged蛋白質(zhì)具有高的選擇性和相對弱的非特異性吸附，其最大

4、吸附量為12.98 mmol/g。
　　(3) Ni(OH)2/HAP納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)
　　采用水熱法成功制備了Ni(OH)2/HAP納米微粒，并考察了反應(yīng)條件和Ni2+濃度對Ni(OH)2/HAP粒徑和形貌的影響，Ni2+濃度越低，所得納米微粒的粒徑則越小。這種納米微?？梢灾苯佑糜诩兓疕is-tagged蛋白質(zhì)，并采用三種His-tagged蛋白質(zhì)對其親和特性進行了評價。結(jié)果表明，Ni(O

5、H)2/HAP納米微粒對His-tagged蛋白質(zhì)具有很高的親和分離特性和對His-tag的普適性。
　　(4) Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)
　　采用三步法成功制備了多功能Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒。首先在檸檬酸存在下，水熱法合成Ni(OH)2/HAP納米微粒。其次羅丹明B與水合肼回流12 h合成羅丹明酰肼（RBH）。最后RBH與微粒表面羧基反應(yīng)形成Ni(OH