蠅蛹金小蜂地理居群COI和ITS基因序列系統(tǒng)進(jìn)化分析及微衛(wèi)星多態(tài)性位點(diǎn)篩選.pdf

1、蠅蛹金小蜂(Pachycrepoideus vindemmiae)是家蠅蛹期常見寄生蜂種類,屬于小蜂總科(Chalcidoidea)金小蜂科(Pteromalidae)。它廣泛分布于全球不同地區(qū),是多種蠅類害蟲的優(yōu)勢(shì)寄生蜂種類,在果園和畜牧養(yǎng)殖業(yè)的生物防治中有重要作用。為了獲得該物種遺傳多樣性信息及種群系統(tǒng)進(jìn)化動(dòng)態(tài)發(fā)展,我們利用線粒體COI基因、核基因ITS1和ITS2為標(biāo)記,對(duì)中國(guó)12個(gè)不同地方蠅蛹金小蜂的遺傳多樣性進(jìn)行了系統(tǒng)分析,并

2、基于序列信息對(duì)該種群歷史動(dòng)態(tài)進(jìn)行了初步探討。我們發(fā)現(xiàn)來(lái)自儋州的蠅蛹金小蜂與大陸其他種群比較有差異。隨后,我們采用磁珠富集法構(gòu)建微衛(wèi)星文庫(kù),篩選出多態(tài)性微衛(wèi)星位點(diǎn),利用這些位點(diǎn)對(duì)蠅蛹金小蜂種群遺傳多樣性進(jìn)行初步分析。具體研究結(jié)果如下:
　　對(duì)中國(guó)12個(gè)地方的蠅蛹金小蜂樣品的COI基因、ITS1和ITS2部分序列進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序。蠅蛹金小蜂線粒體 DNA COI基因序列可用于分析的長(zhǎng)度為707bp,堿基T、C、A、G平均含量分別為41.9

3、％、12.1%、32.4%和13.7%。ITS1和ITS2可用于序列分析的長(zhǎng)度分別為994bp和331bp。ITS1基因序列堿基T、C、A、G平均含量分別為24.1%、22.3%、27.5%和26.0%, ITS2基因序列堿基T、C、A、G平均含量分別為23.9%、21.4%、29.9%和24.8%。結(jié)果表明,序列未見插入和缺失。對(duì)COI序列、ITS1序列及ITS2序列進(jìn)行拼接處理和分析,使用MEGA5.0軟件,建立MP樹,發(fā)現(xiàn)來(lái)自儋州

4、的蠅蛹金小蜂與大陸其他種群比較略有差異,可能地理區(qū)域隔離導(dǎo)致這種情況的產(chǎn)生。
　　利用生物素標(biāo)記的(AC)12、(AG)12兩種探針,篩選得到250個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)得到120對(duì)引物。利用PCR方法檢測(cè)設(shè)計(jì)得到的引物,結(jié)果表明12對(duì)引物能夠特異性擴(kuò)增。隨后,利用TP-M13-SSR毛細(xì)管電泳對(duì)12對(duì)引物進(jìn)行檢測(cè),最后篩選得到10對(duì)多態(tài)性位點(diǎn)引物。在10對(duì)多態(tài)性位點(diǎn)引物中,BL2, BL5, BL7經(jīng)分析偏離哈溫平

5、衡。對(duì)篩選出來(lái)的10對(duì)多態(tài)性位點(diǎn)引物對(duì)30個(gè)蠅蛹金小蜂個(gè)體進(jìn)行檢測(cè),單個(gè)位點(diǎn)的等位基因變化范圍是3-7個(gè),平均每個(gè)位點(diǎn)擁有5.50個(gè)等位基因。觀察雜合度(Ho)變化范圍是0.300-0.867,平均觀察雜合度是(Ho)0.407;期望雜合度(He)變化范圍是0.369-0.775,平均期望雜合度(He)為0.666。蠅蛹金小蜂的多態(tài)信息含量(PIC)為0.334-0.724,平均多態(tài)信息含量(Mean PIC)為0.607。因此可知,這