產(chǎn)胞外多糖酵母菌株的篩選鑒定及多糖結(jié)構(gòu)初步分析.pdf

1、微生物多糖是由細菌、真菌和藻類產(chǎn)生的多糖,以胞壁多糖、胞內(nèi)多糖和胞外多糖3種形式存在。胞外多糖由于具有易于分離、可連續(xù)發(fā)酵、不受季節(jié)、地域和病蟲害的限制等優(yōu)點,日益受到學者們的重視。
　　 酵母多糖是微生物胞外多糖的一種,研究發(fā)現(xiàn)其具有多種生理活性,能夠提高機體免疫力,還具有抗氧化、抗病毒和抑制腫瘤等作用。
　　 本文的主要研究內(nèi)容和成果如下:
　　 (1)從自然界篩選到3株胞外多糖產(chǎn)量較高的酵母菌株,通過5.8

2、S rDNA序列測定及系統(tǒng)發(fā)育分析對這3株酵母進行了鑒定,結(jié)果表明:從左優(yōu)紅葡萄中分離得到的Z14和Z20與東方伊薩酵母(Issatchenkia orientalis)處于同一分支,相似性達到99％以上;從落葉松附近表層土壤分離得到的L25與土生隱球酵母(Cryptococcushumicolus)處于同一分支,相似性為98.8％。
　　 (2)為提高胞外多糖產(chǎn)量,對東方伊薩酵母Z20的發(fā)酵工藝條件進行了研究,Z20產(chǎn)胞外多糖

3、的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖8％,(NH4)2SO40.2％,KH2PO40.1％,酵母浸粉0.1％,CaCl20.01％,在此培養(yǎng)基下,胞外多糖產(chǎn)量為2.046 mg/mL,比原始菌株的產(chǎn)量1.137 mg/mL提高80％。Z20產(chǎn)胞外多糖的最佳發(fā)酵條件為:初始pH為6.0,搖床轉(zhuǎn)數(shù)為180 r/min,裝液量為50 mL/250 mL,發(fā)酵溫度為30℃,接種量為2％,發(fā)酵時間為6 d,在此條件下,胞外多糖產(chǎn)量可達到2.327 mg

4、/mL,產(chǎn)量提高了104％。
　　 (3)菌株Z20的胞外多糖經(jīng)DEAE-Cellulose52層析初步分離純化得到單一的純化多糖組分EPS-Ⅰ。利用傅立葉紅外光譜對EPS-Ⅰ進行分析,發(fā)現(xiàn)EPS-Ⅰ具有-OH、-CH、-C=O等典型的多糖特征官能團;利用氣相色譜對EPS-Ⅰ的水解產(chǎn)物進行分析,結(jié)果表明:EPS-Ⅰ的水解產(chǎn)物由甘露糖、木糖和鼠李糖三種單糖組成,組成比例分別為84.91％、11.47％和3.62％。
　　

5、(4)對菌株Z20胞外多糖的體外抗氧化和體外抑菌活性進行了初步研究。以胞外多糖的總抗氧化能力和對DPPH·、羥基自由基、超氧陰離子的清除率四個方面來考察EPS-Ⅰ的體外抗氧化能力,結(jié)果驗證了EPS-Ⅰ具有抗氧化活性,當EPS-Ⅰ濃度為20mg/mL時,對DPPH·和超氧陰離子的清除率均達到80％以上。用濾紙片法測定了EPS-Ⅰ飽和溶液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣、青霉和黑曲霉的抑制作用,試驗證明EPS-Ⅰ對以上菌種的生