超支化聚縮水甘油醚修飾磁性微球的制備及應(yīng)用.pdf

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析法因具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點，在臨床檢驗方面已經(jīng)成為不可缺少的分析方法。目前已經(jīng)有超過兩百項建立在化學(xué)發(fā)光免疫分析方法上的臨床檢驗項目通過國家食品藥品監(jiān)督管理局審批，比如傳染病、腫瘤、甲狀腺功能、激素、藥物篩查等系列。磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析是一種以磁性微球作為固相載體的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。磁性微球的引入可以實現(xiàn)對待測物-結(jié)合物免疫復(fù)合體的磁性分離清洗，并利用納米級或者微米級的粒子的高比表面積提高針對待測物的結(jié)合物的

2、負(fù)載率。該方法逐漸成為化學(xué)發(fā)光免疫分析中的主流分支。
　　磁性微球作為分析系統(tǒng)中關(guān)鍵的組分—固相載體，其本身的性質(zhì)對于免疫分析的結(jié)果會起到舉足輕重的影響。較小的粒徑將在同等質(zhì)量濃度下提供較大的抗體結(jié)合面積，從而有助于拓寬免疫分析的線性范圍，較大的粒徑將提高反應(yīng)體系在低濃度被檢出物條件下的性能，從而優(yōu)化最低檢測限;磁性微球的表面需要足夠親水從而減少非特異吸附降低本底;磁性微球表面的官能團(tuán)密度要足夠高從而提高抗體在表面的偶聯(lián)率。

3、>　　目前常用的商品化磁性微球是由聚苯乙烯外殼和超順磁性磁流體內(nèi)核構(gòu)成，功能性的基團(tuán)（比如:氨基、羧基等）通過共聚、接枝或者再包裹的方法引入。這種方式的磁性微球有以下兩個顯著缺陷:聚苯乙烯是一種非常疏水的材料，直接應(yīng)用會不可避免的產(chǎn)生非特異性吸附的后果;無論是上述何種方式引入的官能團(tuán)，其密度都不能突破單層表面的最大理論密度，從而限制了抗體在其上的偶聯(lián)量。
　　超支化聚合物是一類有著共焦點，隨機(jī)分支狀結(jié)構(gòu)的高分子，其單個聚合物的焦點

4、結(jié)構(gòu)處至少包含兩個分支，聚合物單體為ABm型。常見的聚合方法有單體縮聚，自凝聚性乙烯基單體聚合以及環(huán)氧基團(tuán)的開環(huán)聚合。超支化聚縮水甘油醚采用環(huán)氧基團(tuán)開環(huán)聚合的方法，較其他兩種方法而言，制備條件簡單，所得聚合物分子量分布集中?？s水甘油屬于典型的AB2單體，含有高活性的環(huán)氧基團(tuán)，聚合后可以得到超支化聚合物，其聚合物的端基處含有大量羥基，有著優(yōu)良的親水特性，同時大量的羥基也為表面修飾以及抗體偶聯(lián)提供了可能。
　　本論文的主要工作如下:<

5、br>　　1)本論文將磁性微球通過與超支化聚縮水甘油醚復(fù)合進(jìn)行改性，一方面提高磁性微球本身的親水性，降低聚苯乙烯的非特異性吸附;另一方面，相比僅通過共聚引入官能團(tuán)，不但能確保官能團(tuán)分布在磁性微球的表面，而且在磁性微球表面引入超支化分子后，官能團(tuán)數(shù)量可以大幅提升，其濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過一般的的商品化磁性微球，從而可以提高抗體在磁性微球表面的結(jié)合量，對免疫分析中的標(biāo)記起到放大，對試劑的檢測范圍起到拓寬的效果。
　　2)本論文首次將超支化聚縮水

6、甘油醚修飾的磁性微球應(yīng)用到了化學(xué)發(fā)光免疫試劑的開發(fā)中，以雙抗體夾心法和間接法兩種方法構(gòu)建了基于超支化聚縮水甘油醚修飾磁性微球的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑，從試劑的相關(guān)性、檢測范圍、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性上進(jìn)行了論證，同時與商品化羧基磁珠作性能比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超支化聚縮水甘油醚修飾磁性微球體系檢測范圍更寬，最低檢測限和檢測上限更優(yōu)，因為超支化聚縮水甘油醚修飾的磁性微球由于自身的氫鍵作用在磁性微球表面形成一層水化層，可以阻止蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合，本底大幅降低