酵母延伸體亞復(fù)合物Elp4-6的結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、延伸體(Elongator)復(fù)合物最早發(fā)現(xiàn)于釀酒酵母中，它是由六個蛋白質(zhì)亞基(Elp1-6)組成的復(fù)合物，其中包含兩個亞復(fù)合物：Elp1-3和Elp4-6。延伸體復(fù)合物在酵母和人類中是高度保守的，并在RNA聚合酶Ⅱ所介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄延伸、細胞骨架組裝、胞吐和tRNA修飾等過程中發(fā)揮重要作用。在人類中，Elp1的突變與家族性自主神經(jīng)功能異常(FD)的發(fā)生密切相關(guān)。已有研究數(shù)據(jù)都表明延伸體復(fù)合物具有非常重要的生理功能，但延伸體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)及其組裝

2、的分子機制還不清楚。
　　 本論文通過構(gòu)建表達質(zhì)粒，利用原核表達系統(tǒng)表達yElp4-6三元復(fù)合物，經(jīng)親和層析、凝膠過濾層析和離子交換層析獲得純化蛋白質(zhì)，并利用試劑盒在20℃篩選出蛋白質(zhì)晶體，對初篩晶體進行優(yōu)化；同時表達純化含硒代甲硫氨酸的yElp4-6三元復(fù)合物，獲得優(yōu)化的晶體。通過X射線衍射收集數(shù)據(jù)，解析了酵母延伸體亞復(fù)合物Elp4-6的晶體結(jié)構(gòu)。
　　 Elp4-6三元復(fù)合物的整體結(jié)構(gòu)顯示Elp6作為一個橋梁將Elp