根結(jié)線蟲生防菌的篩選與應(yīng)用研究.pdf

1、本研究通過對江蘇全省根結(jié)線蟲病害分布情況進行調(diào)查,在大部分設(shè)施蔬菜,甚至一些其他經(jīng)濟作物產(chǎn)區(qū)均發(fā)現(xiàn)不同程度的根結(jié)線蟲病害。經(jīng)單卵塊繁殖對采集到的根結(jié)線蟲樣品進行純化培養(yǎng),結(jié)合雌蟲、雄蟲和二齡幼蟲形態(tài)學特征觀察及相關(guān)特征值測量,并利用分子生物學方法,對江蘇省根結(jié)線蟲種類進行了鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),江蘇省主要根結(jié)線蟲群體為南方根結(jié)線蟲。
　　為了有效防治南方根結(jié)線蟲,本研究從根結(jié)線蟲病情較輕的植株根際分離細菌,利用產(chǎn)蛋白酶活性及產(chǎn)纖維素酶活

2、為指標進行初篩;篩選得到2株兩種酶活性都比較高的菌株:Jdml和Jdm2,兩株菌均從瓜萎根際分離得到。在離體條件下研宄其對南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲活性及卵孵化的影響。結(jié)合菌株形態(tài)學、生理生化試驗以及分子生物學方法,鑒定出菌株Jdml為蠟樣芽孢桿菌,菌株Jdm2為枯草芽孢桿菌。
　　在溫室盆栽試驗中,兩株生防菌均能較好地在番茄根際定殖,不僅對番茄根結(jié)線蟲有顯著的防效,而且能夠顯著促進番茄植株生長。選取防效、促生能力以及定殖能力均比較高的

3、菌株Jdm2進行田間小區(qū)試驗,并比較了其與一種殺線劑Avermectins作用效果。研宄發(fā)現(xiàn),單獨使用生防菌Jdm2、單獨使用Avermectins或者兩者混用,在最初的30d防效都比較高,均可達到69％以上。之后隨著栽培時間的增加,防效不同程度地下降,其中Avermectins處理下降最快,而生防菌Jdm2處理后期防效趨于平穩(wěn)。另外,生防菌Jdm2處理還可能明顯增加番茄產(chǎn)量,增產(chǎn)可達31%,相比之下,Avermectins增產(chǎn)不明顯,

4、僅為13%,而混用處理增產(chǎn)水平與單用生防菌增產(chǎn)水平相當,增產(chǎn)率為34%。
　　在田間小區(qū)試驗中,我們還采用PCR-DGGE技術(shù)對處理后番茄根際細菌群落結(jié)構(gòu)進行監(jiān)測。分別對三個采樣時期的DGGE圖譜進行了聚類分析并進行了顯著性檢驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn),生防菌Jdm2處理對番茄根際細菌群落結(jié)構(gòu)影響隨著栽培時間的推移逐漸減小。在第15 d,生防菌Jdm2處理組對照組相似性非常低,差異十分顯著(d-value>100)。到第30 d,生防菌Jdm2

5、處理組與對照組相似性已在80%以上,差異減小(d-value=12.2)。到了第60d,生防菌Jdm2處理組與對照組相似性超過95%,沒有明顯的差異(d-value=0.9)。相比之下,Avermectins處理組與對照組相似性保持在一個比較穩(wěn)定的水平。
　　通過對整個監(jiān)測期的綜合研宄發(fā)現(xiàn)同一采樣時期的DGGE圖譜在聚類分析時相似度較高,而不同時期樣品相似度較低;主成分分析也顯示同一采樣時期的不同樣品在PCA圖中離散較小,而不同采

6、樣時期離散較大,這說明番茄生長階段對番茄根際細菌群落影響較大,生防菌引入初期雖然會對番茄根際細菌群落結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一定程度的影響,但后期這種差異逐漸減小,并恢復(fù)到對照水平?？傮w來看,生防菌的引入不會對土壤細菌群落結(jié)構(gòu)造成威脅。
　　為了研宄活體生防菌與植物源農(nóng)藥混合使用對根結(jié)線蟲的防治效果,利用生防菌Jdm2分別與植物源農(nóng)藥苦參堿、印楝素和藜蘆堿混用對黃瓜根結(jié)線蟲進行防治。研宄發(fā)現(xiàn),單獨使用各菌(藥)劑時,生防菌Jdm2、苦參堿、印楝素