防治根結(jié)線蟲的原核生防菌的篩選及作用.pdf

1、根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)是一種主要的植物寄生性線蟲,每年給農(nóng)業(yè)造成嚴(yán)重的損失.根結(jié)線蟲的原核生防菌(細(xì)菌及放線菌),具有多重防治根結(jié)線蟲機(jī)制,防治效果高,周期長,對環(huán)境、人畜及益蟲安全,適合于綠色環(huán)保型農(nóng)業(yè)發(fā)展的需要.根際細(xì)菌及放線菌已經(jīng)成為防治根結(jié)線蟲的研究熱點(diǎn).在研究中,首先進(jìn)行供試線蟲培養(yǎng),在室內(nèi)用灰葡萄孢菌(Borytiscinerea)培養(yǎng)松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus),在

2、28℃下恒溫培養(yǎng)5d線蟲數(shù)量可以達(dá)到1400條/cm2.在清水中松材線蟲可以存活7~12 d(1條/ul),且12 h內(nèi)線蟲的自然死亡率小于5%.采用液滴法,以Abamectin(1.8%AVM.B1)的1000倍稀釋液的處理供試線蟲,確定以處理30~45 min線蟲的擊倒率達(dá)到57.7%~76.9%為室內(nèi)的篩選指標(biāo).在溫室中,采用盆栽法確定418#菌株為溫室篩選對照.從全國采集32個土壤樣品,分別為植物寄生性線蟲病害土壤和自然土壤,用

3、等比稀釋平板法,以高氏1號培養(yǎng)基和牛肉汁蛋白胨培養(yǎng)基分離出放線菌960株,細(xì)菌346株.通過在室內(nèi)以松材線蟲為供試對象,采用液滴法進(jìn)行初步篩選試驗,溫室中以根結(jié)線蟲為供試對象,采用盆栽方法進(jìn)行復(fù)選,共篩選出六個菌株,它們可以有效的殺死線蟲,明顯的減少根結(jié)數(shù)量.B24-14菌株、G21-31菌株培養(yǎng)液在45min時對線蟲的擊倒率分別為95.4%、84.5%,在溫室試驗中分別使根結(jié)減少75.0%、67.3%.B24-14菌株、G21-31菌

4、株在防治根結(jié)線蟲,促進(jìn)植物生長方面效果顯著優(yōu)于418#菌株及abamectin(1.8%AVM.B1).通過經(jīng)典的分類方法、化學(xué)分類方法和16SrDNA方法相結(jié)合,對篩選出優(yōu)秀的細(xì)菌和放線菌菌株進(jìn)行分類鑒定.經(jīng)鑒定菌株G10-16為鏈霉菌屬弗氏亞群亞群(Streptomyces Fradiae);菌株G21-31為鏈霉菌屬藍(lán)色亞群(Streptomyces Gyaneus);菌株G21-33為鏈霉菌屬黃色亞群(Streptomyces

5、Flavus);菌株B22-3、菌株B24-14為芽孢桿菌屬蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis).對B24-14菌株的防治作用機(jī)制研究中,采用乙醇分級沉淀法并結(jié)合紫外分光檢測,從B24-14菌株的培養(yǎng)液中分離出β-外毒素,并通過液滴法及細(xì)胞培養(yǎng)板法試驗,證明β-外毒素(4mg/ml)在8h時線蟲的殺死率可以達(dá)到93.75%.采用離心法制得伴孢晶體,并用蛋白晶體堿解液將其降解為可溶性的小分子蛋白,經(jīng)試驗伴孢晶體蛋白(