花生肽的酶法制備、分離純化及其抗氧化活性研究.pdf

1、我國(guó)花生資源非常豐富，花生蛋白質(zhì)具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有人體必須的八種氨基酸。目前，結(jié)合低溫冷榨花生餅粕加工，花生脫脂蛋白資源開發(fā)功能肽成為研究熱點(diǎn)，本文通過(guò)蛋白酶在溫和的條件下水解花生蛋白而獲得的花生抗氧化肽。
　　 本文利用花生脫脂蛋白為原料，采用胰蛋白酶、風(fēng)味酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和堿性蛋白酶水解，進(jìn)行花生分離蛋白的酶解試驗(yàn)，與溫度、反應(yīng)時(shí)間、酶與底物質(zhì)量比(酶底比)、底物濃度(w/v)、pH等因素均對(duì)酶解液水解度(DH

2、)和多肽得率(TCA-NSI)產(chǎn)生影響。在此基礎(chǔ)上，篩選出堿性蛋白酶和風(fēng)味酶為工具酶。為優(yōu)化堿性蛋白酶和風(fēng)味酶酶解花生蛋白的工藝條件，通過(guò)正交旋轉(zhuǎn)組合建立了短肽得率及水解度與各影響因素的回歸模型；結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)確定了堿性蛋白酶酶解花生蛋白的最佳參數(shù)組合為：溫度為55℃、pH值8.4、底物濃度為4.31％、酶底比為3.39％、水解時(shí)間4h。在此條件下，花生多肽得率為74.88％，水解度為23.40％。風(fēng)味酶酶解花生蛋白的最適參數(shù)組合為：溫度

3、59.30℃、pH值7.45、底物濃度為5.60％、酶底比為5.03％、時(shí)間2h。在此條件下，花生多肽得率為77.17％，水解度為22.84％。
　　 在堿性蛋白酶和風(fēng)味酶的酶解最適條件下，水解時(shí)間分別為15，30，60，90，120，150，180min。然后研究不同水解度水解物的抗氧化活性。研究表明，兩種酶解物都顯示出較強(qiáng)的還原能力、抗氧化能力、清除自由基的能力。且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，水解度和還原能力、抗氧化能力、清除自由基的能

4、力逐漸增強(qiáng)，堿性蛋白酶水解物抗氧化活性高于風(fēng)味蛋白酶。兩種酶解液的抗氧化活性都隨著濃度的增加而增強(qiáng)，且在一定濃度條件下，堿性蛋白酶酶解液抗氧化活性強(qiáng)于風(fēng)味酶酶解液。
　　 采用截留分子量8K Da、3.5K Da、1K Da的透析袋對(duì)花生蛋白酶水解液進(jìn)行分級(jí)分離。不同蛋白酶解物配制相同的濃度，樣品分子量范圍在1K Da以下的多肽混合物的含量分別為堿性蛋白酶和風(fēng)味酶的總水解物的76.21％和83.42％。不同分子量范圍的水解物均具

5、有一定的清除羥基自由基的能力。其清除自由基程度隨分子量的減小而增大。分子量范圍在1K Da以下的組分清除自由基的能力最強(qiáng)。其清除率分別為78.49％和67.83％。堿性蛋白酶水解物小于1K Da組分的自由基的清除率高于風(fēng)味蛋白酶。Tricine-SDS-PAGE電泳圖譜表明，透析袋分級(jí)效果明顯，三分級(jí)組分在分子量上明顯小于未水解的花生蛋白，且三者的分子量分布呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)。
　　 經(jīng)過(guò)葡聚糖凝膠層析Sephadex G-25、葡聚

6、糖凝膠層析Sephadex G-15分離技術(shù)，從花生蛋白的堿性蛋白酶水解液和風(fēng)味蛋白酶水解液小于1K Da組分中分別分離出了抗氧化活性較高的組分J22和F22，其相應(yīng)的自由基清除率分別為85.16％和76.83％。氨基酸分析表明：J22、F22和花生分離蛋白相比，組成氨基酸種類發(fā)生了變化，花生分離蛋白中含有15種氨基酸，而J22和F22中含有9種氨基酸?；ㄉ蛛x蛋白中未檢測(cè)出甘氨酸，而在J22和F22組分中未檢測(cè)出谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸