木瓜蛋白酶酶解蠶蛹蛋白動力學的研究.pdf

1、廣西具有豐富的蠶蛹資源,蠶蛹蛋白作為一種優(yōu)質(zhì)的蛋白被人們廣泛的重視,以蠶蛹蛋白為原料經(jīng)過蛋白酶水解生成生物活性肽具有很大的利用價值和市場前景。本文研究了木瓜蛋白酶酶促水解蠶蛹蛋白的反應(yīng)過程,建立了可控水解動力學模型和四集總動力學模型,并估算出模型參數(shù)和實驗驗證。主要內(nèi)容包括:
　　 確定超聲波輔助石油醚萃取蠶蛹原料的脫脂工藝,最佳工藝條件為:提取時間30min.、固液比1:5、超聲功率250W,萃取一次,此時蠶蛹粉中蛋白質(zhì)含量為

2、84.26％。并高效液相色譜法分析蠶蛹蛋白中氨基酸的種類和含量,結(jié)果表明蠶蛹蛋白中氨基酸種類齊全,其中8種必需氨基酸占總量的60％,是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白原料。
　　 采用福林法測定了木瓜蛋白酶在不同溫度下的酶失活速率,考察了酶失活速率常數(shù)與溫度的關(guān)系,得到木瓜蛋白酶失活速率方程。在木瓜蛋白酶酶解蠶蛹蛋白的過程中,考察底物濃度、酶濃度和溫度對水解度影響,結(jié)果表明水解度與底物濃度的增大成反比,與酶濃度和溫度的增加成正比。根據(jù)實驗結(jié)果和經(jīng)

3、驗公式推導出可控酶解動力學方程為r=(45.71eo+0.1794so)exp(-0.1DH),同時對模型的準確性進行實驗驗證,結(jié)果顯示在一定范圍內(nèi)模型可以表征木瓜蛋白酶.蠶蛹蛋白體系的反應(yīng)規(guī)律。
　　 通過體積排阻色譜考查分析木瓜蛋白酶酶解蠶蛹蛋白反應(yīng)的全過程,分子量大的多肽被逐漸水解成小分子多肽,隨著反應(yīng)的進行反應(yīng)趨于穩(wěn)定。確定了以分子量作為集總劃分的標準,將整個反應(yīng)產(chǎn)物分為四個集總組分。通過色譜分析,建立各集總組分的質(zhì)量與

4、色譜峰面積的線性關(guān)系,計算出反應(yīng)不同時刻產(chǎn)物的質(zhì)量濃度分布。
　　 在合理假設(shè)的基礎(chǔ)上,根據(jù)反應(yīng)機理建立體系的四集總反應(yīng)網(wǎng)絡(luò),推導出各集總組分動力學方程,測定各集總組分的本征動力學常數(shù),利用Marquardt法估算出反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)的速率常數(shù),并考察了個四反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)的動力學常數(shù)與溫度的關(guān)系。在35℃和45℃下,驗證模型的準確性,結(jié)果表明:在一定范圍內(nèi),模型能反映各集總組分的質(zhì)量濃度分布,模型在35℃時的酶解實驗誤差較大,集總方法是分析木瓜