大豆蛋白ACE抑制肽的研究.pdf

1、酶法生產(chǎn)生物活性肽不僅有利于充分利用蛋白質(zhì)資源，而且具有廣闊的膳食或藥物的應(yīng)用前景，其中利用大豆蛋白生產(chǎn)降血壓肽因其安全、高效性而受到了廣泛關(guān)注?？紤]到疏水性氨基酸對(duì)多肽的ACE抑制活性的重要作用，論文研究利用大豆分離蛋白(SPI)的一次水解沉淀，即高分子蛋白片段(high—molecular—weightfractionHMF)制備ACE抑制肽并對(duì)具有高活性的組分進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定。 論文首先對(duì)酶解HMF的條件進(jìn)行優(yōu)化研

2、究。結(jié)果表明，微波預(yù)處理比加熱輔助處理更有助于促進(jìn)HMF水解，且確定最適微波功率為200W，時(shí)間為30s。選用ProteaseN作為適合水解HMF的蛋白酶，其生產(chǎn)ACE抑制肽的最佳水解條件是：底物濃度5％(w/v)，加酶量2％(w/w)，溫度55℃，pH值7.0，水解時(shí)間120min。在以上的水解條件下HMF的酶解液的ACE抑制活性最高，達(dá)到65.1％。同時(shí)，研究表明HMF具有較SPI更高含量的疏水性氨基酸和疏水性值。 采用截留

3、相對(duì)分子質(zhì)量為5000的膜將粗水解液經(jīng)過(guò)超濾分離，收集流出液，水解物的IC50降低了15.5％，達(dá)到了初步純化的目的。采用DA201—C型大孔吸附樹脂能有效脫去HMF水解液中的鹽分，同時(shí)使用不同濃度的乙醇分級(jí)分離，發(fā)現(xiàn)高濃度的乙醇對(duì)洗脫組分的疏水性氨基酸有富集和分級(jí)作用，75％乙醇濃度洗脫下來(lái)的組分具有最高的降血壓活性，IC50達(dá)到0.093mg·mL-1。經(jīng)體外消化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，消化道酶作用后ACE抑制活性基本不變。說(shuō)明經(jīng)以上步驟制得的A

4、CE抑制肽能較好地抵抗消化道酶作用。 采用SephadexG-15分離75％乙醇洗脫下來(lái)的組分，酸性洗脫液：0.2mol·L-1、PH=3.6的醋酸—醋酸鈉緩沖液具有較好的分離效果，收集得到ACE抑制活性最高的兩個(gè)組分，IC50分別為41μg·mL-1和43μg·mL-1組分。其中一個(gè)組分經(jīng)半制備RP—HPLC分離，得到具有最高ACE抑制活性的組分P6—IV，結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用，分析其一級(jí)結(jié)構(gòu)，其氨基酸序列可能是Ser—Tro，IC5