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文檔簡介
1、微生物中的各種酶類具有巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。它的開發(fā)和利用,對于提高人們生活質(zhì)量有重要意義。對于這些蛋白酶的理化性質(zhì)、生物活性和催化機(jī)理等方面的基礎(chǔ)研究有助于發(fā)現(xiàn)它更廣闊的應(yīng)用前景。如今,酶類在食品發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn),生物制劑等方面己得到廣泛的應(yīng)用。
本文借助結(jié)構(gòu)生物學(xué)中晶體學(xué)的方法,通過獲悉蛋白酶的空間結(jié)構(gòu)來推測酵的功能,探討催化機(jī)理。研究中以激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中潛在的參與脂肪酸合成酶類PFS(
2、PF2046)和脆弱擬桿菌(Bacteroides.fragilis 9343)中的糖合成酶FKP為研究對象,將其基因構(gòu)建至原核表達(dá)載體。pMCSG7中,使用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)大量表達(dá)出帶有His標(biāo)簽的可溶性融合蛋白,經(jīng)鎳離子柱親和層析,離子交換及分子篩層析純化后,得到純度達(dá)95%以上蛋白。使用商品化試劑盒進(jìn)行晶體生長條件篩選,解析了PFS的三維結(jié)構(gòu),并對其功能進(jìn)行初步研究。同時(shí)得到了FKP蛋白的微晶,經(jīng)過結(jié)晶條件
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