高山被孢霉△6脂肪酸脫飽和酶基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、γ-亞麻酸（γ-Linolenic acid，GLA）屬于n-6系列多不飽和脂肪酸，是合成前列腺素E1和E2的前體，在維持人的正常生理功能中起著重要作用。高山被孢霉是花生四烯酸高產(chǎn)菌株，在其生物合成途徑中含有γ-亞麻酸合成的關(guān)鍵酶－△6脂肪酸脫飽和酶。
　　 本文利用高山被孢霉W15為材料，克隆了△6脂肪酸脫飽和酶基因全長(zhǎng)和△6脂肪酸脫飽和酶的cDNA序列，并對(duì)克隆的△6脂肪酸脫飽和酶基因進(jìn)行了表達(dá)分析?！?脂肪酸脫飽和酶基因的

2、全長(zhǎng)為2202bp，該序列長(zhǎng)度在高山被孢霉中是國(guó)內(nèi)外最新報(bào)道，與已報(bào)道的序列同源性最高達(dá)99%；結(jié)構(gòu)分析表明，該序列含有兩個(gè)內(nèi)含子，分別處于17-229bp和410-1024bp位置。以高山被孢霉W15 RNA為模板，通過RT-PCR擴(kuò)增出可能的△6脂肪酸脫飽和酶基因，該基因全長(zhǎng)為1374bp，推導(dǎo)的蛋白質(zhì)序列編碼457個(gè)氨基酸，與報(bào)道的高山被孢霉△6脂肪酸脫飽和酶基因的同源性達(dá)到95%，其編碼的蛋白質(zhì)N端具有典型的細(xì)胞色素b5結(jié)構(gòu)域。

3、將該可能的△6脂肪酸脫飽和酶基因連接到畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K上，通過電穿孔法轉(zhuǎn)化到巴斯德畢赤酵母GS115中，1%的甲醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化子表達(dá)外源基因，通過對(duì)轉(zhuǎn)化子油脂的氣相色譜分析，與γ-亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)品做對(duì)照，有γ-亞麻酸峰的出現(xiàn)，證明插入的基因?yàn)椤?脫飽和基因酶?！?脂肪酸脫飽和酶基因的克隆與成功表達(dá)，為進(jìn)一步篩選到高產(chǎn)γ-亞麻酸的菌種并應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，或轉(zhuǎn)入油菜、大豆等油料作物中，以改變其脂肪酸組成，培育新型的作物品系提供前提和基礎(chǔ)