嗜熱絲孢菌脂肪酶富集多不飽和脂肪酸工藝的研究.pdf

1、大量研究表明，多不飽和脂肪酸（如DHA、EPA、DPA等）具有緩解心臟病，抑制癌癥和益智等功效。人體自身只能合成少部分多不飽和脂肪酸，大部分則需從體外攝取。近年來(lái)，市場(chǎng)上涌現(xiàn)出大量富含多不飽和脂肪酸的保健品，且銷(xiāo)售通暢，因此開(kāi)發(fā)多不飽和脂肪酸產(chǎn)品具有巨大的商業(yè)價(jià)值。目前，多不飽和脂肪酸的制備方法主要有物理化學(xué)法和酶法，而酶法因其反應(yīng)條件溫和、無(wú)污染、安全性高等優(yōu)點(diǎn)受到越來(lái)越多的關(guān)注。此外，本實(shí)驗(yàn)室在嗜熱絲孢菌脂肪酶(Thermomyce

2、d lanuginosus lipase，TLL)的表達(dá)量及酶活力方面有詳細(xì)研究，有效降低了酶的生產(chǎn)成本。在此基礎(chǔ)上，本文使用實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵的TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸，并對(duì)其工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。主要研究工作及結(jié)果如下：
　　1.以對(duì)硝基苯酚酯為底物測(cè)定TLL酶學(xué)性質(zhì)。TLL水解pNP酯的最適底物為對(duì)硝基苯酚辛酸酯(pNC)，最適反應(yīng)溫度為30℃，最適pH為8.0,在30℃處理?xiàng)l件下熱穩(wěn)定性良好；K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+

3、、CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)等對(duì)TLL的水解活力有較強(qiáng)的激活作用；Ni2+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+、TritonX-100、Tween20則對(duì)其有強(qiáng)烈抑制作用，SDS的作用不明顯；TLL對(duì)正己烷的耐受性較強(qiáng)，而對(duì)丙酮、叔丁醇的耐受性則較弱。
　　2.優(yōu)化了TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸工藝。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)考察了TLL水解藻油富集多不飽和脂肪酸的影響因素，其最佳反應(yīng)時(shí)間為4h，加酶量12,000U/g油，反應(yīng)

4、溫度40℃，添加劑0.3g/g油，油水比1:3，緩沖液pH8.0。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，考察反應(yīng)時(shí)間、加酶量、反應(yīng)溫度、添加劑四個(gè)因素對(duì)DHA絕對(duì)含量的影響，水解產(chǎn)物經(jīng)氫氧化鉀-乙醇脫酸處理，DHA含量達(dá)41.6％，是原油DHA絕對(duì)含量的2.08倍，回收率達(dá)到81.6%。
　　3.由于氫氧化鉀-乙醇脫酸處理會(huì)產(chǎn)生DHA乙酯，影響產(chǎn)品品質(zhì)，進(jìn)一步探討了分子蒸餾方法對(duì)水解產(chǎn)物脫酸處理的效果，并對(duì)分子蒸餾脫酸的溫度與刮膜器轉(zhuǎn)速進(jìn)行了單