一種可注射水凝膠的制備及其生物相容性研究.pdf

1、組織工程的主要思路是將功能性種子細(xì)胞接種于生物支架材料(細(xì)胞外基質(zhì)extracellularmatrix，ECMs)替代物上，經(jīng)過體外培養(yǎng)或構(gòu)建后移植到體內(nèi)受損組織處用以修復(fù)受損的組織。本課題的主要目的是制備一種溫敏型可注射的水凝膠支架材料，并檢測種子細(xì)胞與這種支架材料的生物相容性。 本文首先制備了一種新型可注射的溫敏型殼聚糖/甘油磷酸鈉/膠原(chitosan/glycerophosphate/collagenC/GP/Co)

2、水凝膠。將2.15％(w/w)的殼聚糖溶液與50％(w/w)的β-甘油磷酸鈉(GP)溶液按一定比例混合得到殼聚糖.甘油磷酸鈉(C/GP)溶液，然后將配制好的2mg·mL-1膠原溶液與殼聚糖.甘油磷酸鈉溶液混合得到殼聚糖/甘油磷酸鈉/膠原水凝膠。測定水凝膠在37℃的成膠時間，掃描電鏡觀察C/GP/Co水凝膠的微觀結(jié)構(gòu)，并測量由水凝膠中提取培養(yǎng)基的滲透壓值。為了檢測所制備的C/GP/Co水凝膠的生物相容性，我們分離并培養(yǎng)人源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

3、(adiposetissue-derivedstemcellsADSCs)作為種子細(xì)胞，檢測其增殖和多向分化潛能。接著將人脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞接種在C/GP/Co水凝膠表面培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的黏附、生長和分布形態(tài)，CCK-8試劑盒測定細(xì)胞增殖情況，LIVE/DEADViability/Cytotoxicity試劑盒染色觀察細(xì)胞死亡狀況。最后將ADSCs包埋在水凝膠內(nèi)部，采用CCK-8試劑盒和掃描電鏡檢測細(xì)胞在水凝膠內(nèi)部的生長狀況

4、。 實驗結(jié)果表明C/GP/Co水凝膠37℃的成膠時間為12min，電鏡照片顯示C/GP/Co水凝膠內(nèi)部呈海綿狀多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為l00-150μm，滲透壓儀測定提取培養(yǎng)基的滲透壓為310-330mmol·kg-1，各種指標(biāo)均適合用于細(xì)胞培養(yǎng)和體外組織構(gòu)建。人源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞呈長梭形貼壁生長，具有良好的增殖能力，能夠向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化。經(jīng)過7天的培養(yǎng)，C/GP/Co水凝膠表面的ADSCs能夠呈長梭狀生長