慶大霉素可視化免疫快速檢測方法的研究.pdf

1、分類號：TS201，6密級：(秘密、機密、絕密)學校代碼：10057研究生學號：09811512慶大霉素可視化免疫快速檢測方法的研究StudyontheVisualImmunoassayforRapidDetectionofGentamicin專業(yè)名稱：農產品加工及貯藏工程(農)指導教師：王俊平教授研究生姓名：徐小婧申請學位級別：農學碩士論文提交只期：2012年3月論文課題來源：自選課題學位授予單位：天津科技大學摘要本論文對慶大霉素的可

2、視化免疫快速檢測方法進行了系統(tǒng)研究，分別采用免疫層析試紙條及免疫親和柱的檢測方法檢測動物源性慶大霉素殘留。采用20nm的膠體金標記慶大霉素多克隆抗體，戊二醛二步法偶聯(lián)卵清蛋白制成慶大霉素包被抗原，采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為20nm膠體金，經(jīng)過一系列優(yōu)化，最終確定膠體金標記抗體最適pH為85，最佳抗體標記量為25燼。根據(jù)最優(yōu)條件成功制得膠體金標記抗體。以硝酸纖維素膜為固相載體，以包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測線和控制線，金標記抗體噴

3、涂在玻璃纖維素墊上，制得快速檢測慶大霉素免疫層析試紙條。本實驗優(yōu)化建立的慶大霉素膠體金免疫層析方法操作簡便、快速，10min內即可得到檢測結果，檢測限為25g，L；同時與同類獸藥及其他族常用獸藥均無交叉，有良好的特異性。選取牛奶、牛肉、豬肉、豬肝、豬腎、雞肉、魚肉、雞蛋作為檢測樣品。所有樣品不需要有機溶劑前處理，添加三個不同濃度的慶大霉素，經(jīng)過簡單的處理即可上樣檢測，并得到與標準溶液梯度檢測近似的結果。方法在牛奶中檢出限為100pg／L

4、，牛肉、豬肉中檢出限為501ag／kg，在其它樣品中檢出限為10099／kg，均低于最高殘留限量。與酶聯(lián)免疫分析方法的一致性較好。試紙條在4。C下密封干燥條件下至少可保存2個月。所研制的試紙條無需任何檢測儀器，操作快速，準確，適用于動物源性食品中慶大霉素殘留的現(xiàn)場大量篩選。本研究采用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠作為固相載體分別偶聯(lián)了抗慶大霉素多克隆抗體及抗HRP多克隆抗體作為檢測層和對照層組裝成的免疫親和檢測柱，所建立的方法檢測限為10rtg