人ABHD16A抗體制備與乙型腦炎病毒可視化快速檢測(cè)方法的建立.pdf

1、人類白細(xì)胞抗原-B(Human leukocyte antigen-B，HLA-B)相關(guān)轉(zhuǎn)錄物5(HLA-B related transcripts5，BAT5)又稱為ABHD16A(Abhydrolase Domain Containing16A)，屬于含有α/β-水解酶折疊結(jié)構(gòu)域(ABHD)蛋白質(zhì)超家族的代謝絲氨酸水解酶。其在Gene Card中的注釋包括甘油衍生物水解酶活性，但其確切的功能有待進(jìn)一步研究。為深入研究ABHD16A促

2、炎癥反應(yīng)功能及與其它涉及免疫的分子之間可能存在的相互關(guān)系，制備了ABHD16A的多克隆抗體。通過(guò)比對(duì)已知的哺乳動(dòng)物的ABHD16A的氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)ABHD16A具有高度保守性(98.01％)。根據(jù)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(National Center of Biotechnology Information，NCBI)上提交的人ABHD16A基因編碼序列(Coding sequence，CDS)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，以人肝癌細(xì)胞Hep

3、G2cDNA為模板擴(kuò)增ABHD16A編碼區(qū)，將其定位克隆至表達(dá)載體pET28a，并在E.coli BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)以切膠免疫和包涵體免疫分別制備ABHD16A的抗血清，制備的抗血清同樣能夠結(jié)合其它哺乳動(dòng)物的ABHD16A，然后利用人肝癌細(xì)胞HepG2中過(guò)表達(dá)的Sus Scrofa ABHD16A來(lái)最終檢驗(yàn)抗血清的特異性。結(jié)果表明，通過(guò)直接利用人AB HD16A包涵體蛋白輔佐劑免疫Balb/c小鼠獲得的血清，具有與ABH

4、D16A結(jié)合的活性，為進(jìn)一步研究ABHD16A的功能提供了實(shí)驗(yàn)材料，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　日本流行性腦炎(Japanese Epidemic Encephalitis，JE)是由日本流行性腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV)通過(guò)血腦屏障感染腦組織細(xì)胞引起的病變，是一種人畜共患的蚊媒傳染病，嚴(yán)重危害人類健康和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。根據(jù)JEVE蛋白的核苷酸序列，利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-medi