流行性乙型腦炎病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法的建立.pdf

1、流行性乙型腦炎(Japanese encephalitis，JE)是由乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitis virus，JEV)引起的嚴(yán)重的人畜共患病，對(duì)人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)危害巨大。目前，乙型腦炎病毒的檢測(cè)方法有病毒分離鑒定、免疫學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)等。這些檢測(cè)方法雖然為乙型腦炎的診斷提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持，但存在著耗時(shí)長(zhǎng)，費(fèi)用高等缺點(diǎn)。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(Loop-mediated isothermalamplifi

2、cation，LAMP)是一種新型的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，若能利用該技術(shù)檢測(cè)流行性乙型腦炎病毒可以克服以上缺點(diǎn)。
　　 本研究根據(jù)JEV基因序列設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物，采用LAMP方法對(duì)流行性乙型腦炎病毒核酸進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增，建立優(yōu)化了兩步法和一步法兩種檢測(cè)方法。兩步法LAMP檢測(cè)體系中含有0.2μM F3、B3，2μM FIP、BIP，0.8μM FLP、BLP，0.4 mM dNTP，20 mM Tris-HCl(pH8.8)，10

3、 mM KCl，10 mM(NH4)2SO4，6 mMMg2+，0.1％Triton X-100，1.1 mM Betaine，8U BST聚合酶，于65℃水浴鍋中放置60min。一步法RT-LAMP檢測(cè)體系中0.2μM F3、B3，2μM FIP、BIP，0.8μM FLP、BLP，0.8 mM dNTPs，20 mM Tris-HCl(pH8.8)，10 mM KCl，10 mM(NH4)2SO4，6 mM Mg2+，0.1％Tri