逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增檢測風疹病毒RNA方法的建立和應用.pdf

1、目的：建立一種靈敏度高、特異性強、簡單快速、低成本檢測風疹病毒RNA的方法。
　　 方法：選取保守基因E1設(shè)計引物，采用逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增(ReverseTranscription-Loop-Mediate Isothermal Amplification，RT-IAMP)技術(shù)建立了檢測風疹病毒RNA的方法，優(yōu)化RT-LAMP反應體系，并進行特異性、敏感性評估，在此基礎(chǔ)上建立依據(jù)SYBR Green I顯色反應直接判斷結(jié)果的簡

2、便方法。為驗證我們建立方法的臨床應用價值，最后用建立的方法對103例孕婦血清標本進行檢測，并與RT-PCR及ELISA相比較。
　　 結(jié)果：通過對建立的RT-LAMP擴增風疹病毒RNA反應體系的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)鎂離子對RT-LAMP影響較大，其它如甜菜堿、溫度等影響不是很大。特異性評估表明僅風疹病毒檢測陽性，而雙蒸水、人類基因組RNA、丙型肝炎病毒RNA檢測均為陰性，酶切鑒定結(jié)果進一步證明了擴增的特異性。檢測下限約為每反應管10拷貝。